论文部分内容阅读
目的:本课题拟研究狼毒大戟提取物联合吡咯替尼对人乳腺癌SK-BR-3细胞株生长抑制作用及其机制。材料与方法:1.研究对象:将人乳腺癌SK-BR-3细胞株用于实验研究。2.实验药物:狼毒大戟提取物、吡咯替尼3.实验方法:运用CCK-8实验方法检测狼毒大戟提取物对人乳腺癌SK-BR-3细胞株增殖是否有影响,狼毒大戟提取物的药物浓度分别为1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml、50mg/ml、75mg/ml、100mg/ml、200mg/ml,并计算出IC50值;应用CCK-8实验方法检测吡咯替尼是否对人乳腺癌SK-BR-3细胞株增殖有影响,吡咯替尼采用的药物浓度分别为0.1nmol/L、0.5nmol/L、1nmol/L、2nmol/L、5nmol/L、10nmol/L、20nmol/L、50nmol/L,并计算出IC50值;应用CCK-8实验方法检测狼毒大戟提取物对正常人乳腺细胞株MCF-10A是否具有细胞毒性作用,狼毒大戟提取物药物浓度为1mg/ml、5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml、50mg/ml、75mg/ml、100mg/ml、200mg/ml;采用CCK-8法检测狼毒大戟提取物联合吡咯替尼对人乳腺癌SK-BR-3细胞株增殖的影响,应用1mg/ml、5mg/ml狼毒大戟提取物分别与0.1nmol/L、0.5nmol/L、1nmol/L、2nmol/L、5nmol/L、10nmol/L、20nmol/L、50nmol/L吡咯替尼联合使用,并分别计算出IC50值。用流式检测术检测狼毒大戟提取物(1mg/ml、5mg/ml)、吡咯替尼单药(选取48h IC50浓度)以及狼毒大戟提取物联合吡咯替尼对人乳腺癌SK-BR-3细胞株细胞周期以及凋亡的影响。结果:1.不同浓度狼毒大戟提取物与吡咯替尼显著抑制人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖,并且呈浓度和时间相关性。狼毒大戟提取物IC5024h为:68.20mg/ml、IC5048h为:55.60mg/ml;吡咯替尼IC5024h为:7.12nmol/L、IC5048h为:4.07nmol/L。2.不同浓度的狼毒大戟提取物作用于正常人乳腺细胞株MCF-10A 24h、48h后,与对照组相比,1mg/ml、5mg/ml狼毒大戟提取物对细胞存活率无明显变化(24h细胞存活率分别为99.77%、98.73%;48h细胞存活率分别为96.71%、95.41%),不具有显著细胞毒性作用。3.1mg/ml、5mg/ml狼毒大戟提取物与0.1nmol/L～50nmol/L吡咯替尼联合处理SK-BR-3细胞48 h后具有协同抑制细胞增殖的作用,吡咯替尼IC50由4.07nmol/L分别降至2.31nmol/L和1.04nmol/L。4.狼毒大戟提取物(1mg/ml、5mg/ml)、吡咯替尼单药(4nmol/L)以及狼毒大戟提取物联合吡咯替尼处理人乳腺癌SK-BR-3细胞48h后,结果显示细胞出现G2/M期周期阻滞,且狼毒大戟提取物可以增强吡咯替尼诱导的G2/M周期阻滞。5.狼毒大戟提取物(1mg/ml、5mg/ml)、吡咯替尼单药(4nmol/L)以及狼毒大戟提取物联合吡咯替尼处理人乳腺癌SK-BR-3细胞48h后,结果显示细胞均出现不同程度凋亡,且狼毒大戟提取物可以增强吡咯替尼诱导的SK-BR-3细胞凋亡率。结论:狼毒大戟提取物可增强吡咯替尼对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖的抑制作用,且二者具有协同作用。此外,狼毒大戟提取物还可增强吡咯替尼诱导人乳腺癌SK-BR-3细胞的凋亡及G2\M周期阻滞。