海洋放线菌HN-3-14次级代谢产物分离及结构鉴定

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本文实验菌株为分离自中国海南省洋浦湾水深20米处(1096’E,·1941’N)的一株Mycale-phvllophla海绵标本。其16S rDNA序列与Microbacterium esteraromaticum DSM 8609(T)的同源性最高,达到99.2%,确定该菌株归属为微杆菌Microbacterium sp.,命名为:HN-3-14,菌株保存于厦门医学院海洋生物共附生微生物库。从基础培养基类型、盐浓度、pH值、培养温度等环境因素,对HN-3-14的培养条件进行比较分析,结果发现该菌株具有良好的环境适应性,(这里提供该培养基能正常生长的培养条件);为了更好地激活该菌株的次级代谢产物基因表达,依据放线菌的代谢工程原理,将代谢途径的反馈抑制剂如:葡糖胺,甘露醇和花生油等分别加入到基础培养基中。通过对不同培养条件下次生代谢产物的丰富度分析,发现该菌株在寡营养培养基为基础培养基,并添加0.1%的花生油,盐浓度:3%,pH:7.5,温度:28℃的条件下,能够获得较好的次级代谢产物丰度。以此培养条件对菌株进行180 rpm震荡培养28天。发酵液离心去除菌丝体后用大孔树脂孵育吸附,60%乙醇洗脱收集代谢物,旋转蒸发浓缩,获次级代谢产物浸膏162.1 g。利用TLC薄层层析色谱、Sephadex LH-20凝胶柱层析、正相硅胶柱层析、HPLC高效液相色谱等实验方法,分离、纯化其培养产生的次级代谢产物,共得了化合物单体10个。根据核磁共振波谱(NMR)和ESI-高分辨质谱(ESI-HRMS)分析数据,及X射线单晶衍射分析、将它们分别解析为pyrimidine-2,4(1H,3H)-dione(1),4-hydroxybenz aldehyde(2),(S)-N-(2-hydroxy-5-oxo-2,5-dihydrofuran-3-yl)acetamide(3),N-(5-(2-hy droxyacetyl)furan-3-yl)acetamide(4),2-hydroxybenzoic acid(5),indoline-3-cardehyde(6),(Z)-5-hydroxy-2-(2-hydroxyethylidene)-2H-pyrrol-4-yl acetate(7),(E)-5-hydroxy-2-(2-hydroxyethylidene)-2H-pyrrol-4-yl acetate(8),N-(5-hydroxy-2-oxo-2H-pyrrol-4-yl)acetamid(9),N-(5-(1,2-dihydroxyethyl)-2-oxo-2,5-dihydrofuran-3-yl)acetamide(10)。其中化合物7与化合物8互为同分异构体。经SCI FINDER检索发现化合物3,4,7,8和9尚未见研究报道。本论文的研究表明海洋生物共附生放线菌是新化学结构天然产物的重要来源,将为新药研发提供更多的新化学实体。
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