大岛野路菊CcSOS1基因的克隆与表达分析

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土壤中过多的Na+会导致植物产生盐害,严重影响植物生长和发育,而质膜型Na+/H+逆向转运蛋白可以将植物细胞内多余的Na+排出胞外,是植物抵御盐胁迫的主要方式之一,在植物耐盐性方面起着重要的作用。大岛野路菊为菊科菊属草本植物,原产日本沿海地区,具有良好的耐盐能力。本研究通过GenBank上登录的其它植物质膜型Na+/H+逆向转运蛋白基因SOS1的保守序列设计简并引物,利用RT-PCR和RACE等技术克隆到了大岛野路菊质膜型Na+/H+逆向转运蛋白基因的cDNA全长序列,命名为CcSOS1。序列分析显示,CcSOSl全长3752bp,开放阅读框(ORF)为3438bp,编码1145个氨基酸。疏水性和跨膜分析结果表明,CcSOSl的N-端高度疏水并含有12个跨膜区域,C-端高度亲水且全部位于细胞质中。序列比对发现,CcSOS1与葡萄VvSOS1、番茄S1SOS1和胡杨PeSOS1等的同源性较高,分别为79.11%、77.68%和76.04%。系统进化树分析表明,CcSOS1属于质膜型Na+/H+逆向转运蛋白。通过CcSOS1-GFP对CcSOSl进行亚细胞定位,结果显示CcSOS1位于细胞的质膜上。荧光定量PCR (qRT-PCR)显示,正常生长条件下CcSOSl基因在植物的根和叶中均有表达,且在叶片中的表达量稍高于根中的表达量,表明CcSOSl为组成型表达,且无明显的组织特异性。NaCl胁迫下,根中CcSOSl的表达水平在处理1h内便达到顶峰,约为对照的11倍,表明可显著提高CcSOSl在植物根中的表达水平;干旱(20%PEG6000)、低温(4℃)和ABA等处理也可不同程度地影响CcSOSl的表达,但具体影响形式互有差异;此外,在NaCl胁迫时添加外源Ca2+可提高植物根中CcSOSl的表达水平。通过插入中间片段在植物表达载体中添加了新的限制酶酶切位点的方法,成功构建CcSOSl基因的植物双元表达载体pC AMBI A-1301-220-CcSOSl,为进行植物转化并深入研究CcSOS1基因的功能奠定了基础。
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