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miRNA是一类短的非编码内源性RNA分子,是基因表达和逆转录的关键性调节因子,可以作为细胞分化、增殖或凋亡等生理过程的指标。它与肿瘤生长和抑制过程有密不可分的作用,因此,miRNA的检测对于疾病预防、临床诊断和癌症治疗有重要的价值。由于其具有尺寸小,家族成员之间序列同源性高和丰度低等特征,发展合适的检测miRNA方法具有高挑战性。传统的miRNA检测方法包括Northern印迹,逆转录定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）和微阵列等,这些方法虽然可部分满足检测的需求,但具有灵敏度低,设备昂贵,耗时久和操作复杂等缺点,限制了它们在生物医学中的广泛应用。DNAzyme是一类可以催化许多化学反应的单链核酸,具有高稳定性、低非特异性吸附、催化活性好和制备方便等独特的性质,其作为无酶催化反应的信号放大器已被广泛用于DNA、蛋白质和金属离子的高灵敏检测。本论文基于DNAzyme的催化放大特性,发展了两种荧光/比色传感方法,用于多种miRNA目标链的同时分析检测研究:1、基于DNAzyme信号放大的比色传感方法用于多种miRNA的检测研究本章构建了一种双DNAzyme催化放大的比色传感策略:利用8-17 DNAzyme和G-四聚体DNAzyme结合形成底物链,两条裂开的酶链末端与底物链部分互补配对,此时由于构象的错配无法进行切割反应,当靶标链miR-122存在时,DNAzyme的构象重新排列,引发自催化底物链的切割,同时活化的DNAzyme将自动移动至邻近的底物链进一步切割,从而实现第一步的循环放大过程;释放的G-四聚体与Hemin形成G-四聚体/Hemin复合物,有效地催化H2O2使ABTS2-氧化成肉眼可识别的有色产物ABTS·-,从而实现第二步的信号放大过程及目标miRNA的比色检测。此外,通过改变两条酶链末端的碱基可以实现多种miRNA的检测。这种比色方法具有高特异性、操作简单、低成本等优点,具有良好的实用性。2、基于DNAzyme信号放大的悬浮微球阵列用于多种miRNA的检测研究本章首先将标记有荧光基团FAM和猝灭基团Dabcyl的8-17 DNAzyme的底物链分别固定于四种不同尺寸的聚苯乙烯（PS）微球,然后将带有不同miRNA识别片段的裂开型DNAzyme序列与相应的PS球孵育,构建一种基于DNAzyme催化切割放大的悬浮微球阵列。选择miR-21、miR-122、miR-335和miR-155四种miRNA链作为检测对象。在相应靶标miRNA存在下,可以激活DNAzyme导致相应PS球上底物链的切割,导致猝灭基团远离荧光团,PS球的荧光恢复。同时释放的miRNA可以进一步激活DNAzyme实现底物链的自动连续的切割,实现酶促荧光信号的放大。利用流式细胞仪记录不同尺寸的PS微球的荧光信号,从而实现对多种miRNA的同时识别与检测。