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目的表观遗传学是研究基因组DNA序列不发生变化而发生的基因表达的可遗传改变的学科。目前,表观遗传学研究主要包括:DNA甲基化、组蛋白密码和染色质重塑、非编码RNA调控,在他们相互作用的系统中某一环节的异常就可以导致基因的不正常表达,从而导致包括肿瘤在内的与表观遗传学相关的疾病。肿瘤的发生是由于细胞出现异常增殖,在过去,绝大多数研究都是从编码蛋白的原癌基因和抑癌基因出发来进行研究。然而,随着研究的进展发现某些肿瘤较少甚至完全没有基因突变,以及miRNA家族对转录后水平极强的调节能力,让越来越多的科研人员将重点转移到miRNA与肿瘤的关系上来。Dicer是miRNA形成过程中必须的酶,所以当Dicer基因表达异常时可能会引起某些miRNA的表达异常从而引起某些癌基因表达增加或抑癌基因表达下降,细胞或组织异常增生,导致肿瘤的发生。为了进一步研究Dicer基因表达上调在肿瘤发生中的作用,我们设计了本实验,拟通过Dicer基因稳定转染人胚肺细胞(HELF),制作Dicer基因高表达的细胞模型,通过检测转染后HELF细胞增殖能力和迁移能力的变化来分析Dicer基因在肿瘤发生中所行使的功能。方法将pcDNA3.1-Dicer表达质粒应用脂质体介导方法体外稳定转染人胚肺细胞HELF,以转染空载体pcDNA3.1的HELF细胞作为对照,在转染48小时后1:7传代,通过G418筛选细胞克隆,挑取单克隆。应用PCR方法初步筛查HELF细胞中Dicer基因在DNA水平的整合,然后PCR阳性的细胞用RT-PCR方法检测Dicer基因在RNA水平的表达;根据RT-PCR结果,分别选择转染pcDNA3.1和pcDNA3.1-Dicer细胞各一株进行Western-blot蛋白水平检测、分析;应用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色实验(MTT)检测转染后细胞增殖能力的改变;应用侵袭力(Transwell)实验检测细胞迁移侵袭能力的改变。综合分析Dicer基因在肿瘤细胞增殖及侵袭转移过程中的功能。结果用脂质体介导的方法将pcDNA3.1-Dicer质粒转染人胚肺细胞HELF,G418筛选,挑取单克隆培养,培养细胞用RT-PCR的方法检测到DicermRNA的转录活性明显增强,进一步用Western方法检测到Dicer的蛋白表达水平明显增强,说明转染成功。与转染空载体pcDNA3.1的HELF细胞相比,转染pcDNA3.1-Dicer质粒的HELF细胞24、48、72、96小时的MTT光吸收值显著升高(P<0.05);Trans-well方法检测结果显示,与转染空载体pcDNA3.1的HELF细胞相比,转染pcDNA3.1-Dicer质粒的HELF细胞穿透人工重构基底膜的细胞数明显增多,说明转染pcDNA3.1-Dicer质粒的HELF细胞侵袭能力明显增强。结论pcDNA3.1-Dicer质粒体外稳定转染人胚肺细胞HELF,可以有效地使Dicer基因在RNA水平和蛋白水平表达都增高,并且使HELF细胞MTT光吸收值显著升高和穿透人工重构基底膜的细胞数明显增多,提示Dicer基因高表达可以引起人胚肺细胞的增殖和侵袭迁移能力的增加,说明Dicer基因有增加细胞增殖能力和细胞侵袭迁移能力的功能。