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目的:分别将人类p100基因,p100的SN基因片段和TSN片段定向连入pERFP-CI质粒,使它们可与红色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达,从而为进一步研究p100蛋白及其片段的定位、功能及与其它蛋白的相互关系奠定实验基础。
方法: PCR分别扩增出p100全长,SN片段和TSN片段基因的序列,定向克隆至真核表达载体pERFP-CI,构建相应的3种重组质粒。将构建成功的质粒转染入HeLa细胞,荧光显微镜下可观察红色荧光融合蛋白表达。
结果:①PCR法获得p100基因序列,长度为2659bp,SN基因片段1918bp,TSN基因片段741bp;②将p100全长与pERFP-CI载体分别进行双酶切得到相应的片段,并连接获得重组质粒。将其进行双酶切鉴定可见p100片段。③将经过蓝白斑筛选后的重组子经双酶切再与pERFP-CI载体连接获得重组质粒,相同的酶切鉴定得到SN片段和TSN片段;④转染3种重组质粒后可观察到红色荧光蛋白的分布及表达情况。
结论:3种外源片段成功载入pERFP-CI质粒;p100全长、SN片段、TSN片段均可与红色荧光蛋白在HeLa细胞中融合表达。