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D-乳酸在生物高分子材料、农业、化学工业等领域都有着广泛的用途，高光学纯度的D-乳酸具有广阔的应用前景。将微生物酶应用于不对称催化反应，具有如下优点:反应条件温和、立体选择性、转化率高。为了解决辅酶再生的问题，本文利用基因工程改造的方法，在大肠杆菌中实现了葡萄糖脱氢酶和与D-乳酸脱氢酶的共表达，并以丙酮酸为底物催化合成高光学纯度D-乳酸。 本文以枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)的基因组为模板，经过PCR扩增得到葡萄糖脱氢酶（GlucoseDehydrogenase）基因gdh，与载体pETDuet-1构建了重组质粒pETDuet-GDH，再以重组质粒pET28a-ldh为模板，通过PCR扩增得到乳酸脱氢酶基因ldh，与已构建好的pETDuet-GDH连接，转化E.coli.BL21获得重组菌pETDuet-LG。SDS-PAGE结果表明乳酸脱氢酶和葡萄糖脱氢酶均可成功诱导表达，相对分子质量分别为37kD和31kD，且测得细胞破碎上清中乳酸脱氢酶酶活5.7u/mg，葡萄糖脱氢酶酶活9.2u/mg。 对IPTG诱导重组大肠杆菌表达葡萄糖脱氢酶和乳酸脱氢酶的条件进行了优化。确定了最适诱导条件为，IPTG加入量为0.1mM，诱导温度为30℃，诱导时长为7h，诱导剂的最佳加入时间并无苛刻限制，在OD0.3-1.5范围内进行诱导所表达出的蛋白活性并无太大差异。 对重组大肠杆菌全细胞催化的反应条件进行了优化，以最大程度地提高底物的转化率。结果表明，初始添加NAD+能有效地提高起始反应速度，在完全没有外加辅酶的情况下，全细胞催化反应的启动较慢，可能是由于细胞需自身微弱的代谢产生一定的辅酶后才能正常进行共催化反应，添加少量的辅酶因子则有效地快速启动了反应。最佳催化温度为37℃，最适缓冲液浓度为0.2MK2HPO4/KH2PO4磷酸缓冲液，最适催化pH为7.0，催化时细胞浓度在OD40最为合适，最适底物丙酮酸浓度20g/L，且每次细胞重复利用后活性耗损为15％左右。