大鼠抗汉滩病毒单抗可变区基因的克隆、测序和人—大鼠嵌合抗体的表达及ScFv基因构建的研究

来源 :第四军医大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:zhangsonghuan
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用异硫氰酸胍抽提抗汉滩病毒单克隆抗体大鼠杂交瘤细胞株KF12的总RNA,用逆转录酶合成第一链cDNA,用PCR技术扩增出360bp的重链变区基因(VH)和351bp轻链变区基因(VL),分别克隆至pUCVNP-PCR和pWR13载体上,经筛选和DNA序列分析研究,证实已获得了该单克隆抗体的可变区基因。 通过一系列重组,将PCR扩增的抗汉滩病毒单抗的重链变区基因(360bp),克隆至能在真核细胞中进行表达的载体中得pTZVHBⅡ,然后再与免疫球蛋白重链增强子克隆得pSV-VE质粒,最终和pSVΔHgptHur 3质粒重组,经酶谱分析及Southern blot,挑得一连接方向正确的可表达人—鼠嵌合抗体的嵌合质粒pSVΔHgptRatKF12 VHHur3。通过电脉冲介导基因
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