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药物性肝损伤是常见的药物副作用,而且已经上升至全球死亡原因的第五位。在我国,由药物引起的肝损伤患者逐年增加。对乙酰氨基酚(APAP)诱导的急性肝损伤在欧美国家尤为严重,在我国APAP所致的药物性肝损伤也越来越被重视。由肿瘤坏死因子(TNFa)和D-半乳糖胺(Galactosamine,GalN)诱发的急性肝损伤表现和发病机制与临床乙肝、肝硬化和酒精性肝损伤的病理表现有很大的相似性,也是急性肝损伤常用的典型模型之一。本课题对p53在APAP诱导的肝损伤模型中的作用进行了初步研究,发现樟芝中主要化合物Antcin H在细胞和动物模型中均能预防并治疗APAP诱导的急性肝损伤,对GalN/TNFa诱导的肝损伤也起到显著的预防作用。通过相关蛋白及信号分子的研究,以及对线粒体功能的研究,发现Antcin H保护APAP和GalN/TNFa急性肝损伤的机制是通过抑制p-JNK和线粒体之间的相互结合作用。具体研究结果如下：1.p53在APAP诱导的肝损伤过程中发挥保护作用。通过反义寡聚核苷酸(ASO)、p53抑制剂PFTα以及p53基因敲除三种手段抑制p53蛋白的表达,均能够明显加重APAP诱导的肝损伤程度。由此证明p53在APAP诱导的肝损伤过程中发挥保护作用,而不是普遍认为的致损伤作用。p53激活剂Nutlin-3a体内激活p53蛋白的表达,能够减轻APAP诱导的肝损伤,直接证明适当激活p53可以发挥其保护作用,为临床上治疗APAP诱导的肝损伤提供了一定的理论基础。进一步的研究表明,p53的低表达并没有影响APAP初步代谢为NAPQI,也没有影响GSH的耗竭,p53对APAP诱导的肝损伤的保护作用是通过抑制JNK的磷酸化而产生的。2. Antcin H对于APAP和GalN/TNFa诱导的急性肝损伤有明显的预防作用,而且对APAP诱导的肝损伤具有治疗作用。樟芝提取物和Antcin H口服预处理5天,能够显著的抑制APAP诱导的肝损伤；Antcin H提前1h预处理对APAP诱导的肝损伤起到保护作用；AntcinH对APAP诱导的肝损伤还具有治疗作用；在体外原代细胞模型中也具有保护肝脏的作用。此外,Antcin H预处理可以明显的抑制GalN/TNFa诱导的急性肝损伤；原代肝细胞中,AntcinH也具有抑制Act D/TNFa诱导的肝损伤作用。3.对Antcin H保护急性肝损伤的作用机制进行深入研究,Antcin H抑制了p-JNK和线粒体的结合,缓解了由p-JNK导致的线粒体呼吸功能损伤,从而达到了保护肝脏的作用。在APAP和GalN/TNFa急性肝损伤模型中,Antcin H抑制了MKK4和JNK的持续性激活以及线粒体转移。通过JNK激酶活性实验,排除Antcin H是JNK的直接抑制剂的可能性。通过DPPH实验,排除了Antcin H是自由基清除剂的可能性。通过p-JNK和线粒体的结合实验发现, Antcin H可以抑制p-JNK和JNK与线粒体之间结合作用,同时通过Seahorse Analyzer分析仪检测线粒体呼吸作用发现,Antcin H缓解了p-JNK导致的线粒体功能损伤。