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松材线虫（Pine Wood Nematode,PWN）是松材线虫病（Pine Wood Nematode Disease,PWND）的主要病原,能够对松属植物造成毁灭性的危害,也是目前世界性的检疫有害生物。因松材线虫隐蔽性强,而直接以PWN为靶标进行生物防治的难度较大。苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）是全球开发应用最为广泛的微生物杀虫剂之一,其部分菌株的发酵液具有杀PWN活性。伊氏杀线真菌（Esteya vermicola,Ev）是首次在PWN里发现的内寄生真菌,该真菌产生的新月形孢子对PWN具有侵染和致死活力。本研究拟从杀线虫Bt菌株的筛选入手,研究高毒力杀线虫Bt菌株发酵液的毒力稳定性以及Bt与Ev对PWN的联合毒力。旨在为以后利用Ev和Bt联合防控PWN提供一定的理论依据和技术支持。通过采用直接触杀法对Bt发酵液进行PWN毒力测定。结果显示,从4个菌株中筛选出高毒力的菌株D,其发酵液处理PWN 24h的死亡率达到100%,杀PWN速度也较其它菌株快,处理8h后,PWN死亡率达到70%以上。通过毒力稳定性实验发现菌株D的发酵液对蛋白酶K稳定,耐碱、不耐强酸,对温度不敏感,且在4℃保藏50d后,该菌株发酵液活性并未下降,确定致病因子可能为β-外毒素。PCR鉴定结果显示菌株D的16S rDNA片段与Bt KNU-07的相似度为100%。室内使用Ev孢子悬浮液与Bt发酵液处理PWN,通过PWN的形态变化、死亡率及死亡速度3个方面测定Ev与Bt联合毒力作用。结果表明,经过Ev孢子悬浮液处理过的PWN出现内容物渗漏,体腔收缩、弯曲、断裂的现象;高浓度的Ev孢子悬浮液与Bt发酵液联合处理PWN可以明显地提高PWN的死亡率;当Ev孢子悬浮液浓度为2.5×108cfu·mL-1、Bt发酵液稀释3倍时杀PWN效果最好,可以达到100%;联合处理的PWN死亡速度较快,随着联合处理时间的延长,死亡率呈上升的趋势。温室测定Ev孢子悬浮液与Bt发酵液联合毒力。结果表明,利用高浓度Ev孢子悬浮液与稀释3倍Bt发酵液混合后,注射感染松材线虫病的油松（Pinus tabuliformis Carrière）树苗,发现树苗存活率比单独使用二者的都要高。Ev与Bt联合后,预防组与防治组的效果差异不显著（P<0.05）,而在单独使用高浓度Ev孢子悬浮液处理时,预防组的树苗存活率比防治组的高,稀释3倍的Bt发酵液处理的则防治组的树苗存活率比预防组高。