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上皮性卵巢癌(epithelial ovariancancer, EOC)在女性生殖道肿瘤中死亡率居于首位,是威胁我国妇女生命和健康的主要恶性肿瘤。在人体内部,促性腺激素FSH增高与上皮性卵巢癌的发生密切相关。FSH不但可以促进上皮性卵巢癌细胞的增殖、侵袭、抑制癌细胞的凋亡,而且可以通过作用于炎症因子、生存素、血管形成因子,包括COX-2. Survivin、VEGF、 VEGFR1/Flt-1,诱导炎症效应和血管生成。本课题组在研究FSH与卵巢癌的发生机制上拥有国内领先水平,FSH与COX-2、Survivin、VEGF前期研究已证明：COX-2、Survivin为共协同蛋白,均书写为COX-2/Survivin: FSH可以促进上皮性卵巢癌细胞COX-2/Survivii、VEGF的表达；FSH可以通过PI3K/AKT-Survivin通路和上调HIF-1a的表达,进而上调VEGF的表达。但有关FSH如何调节VEGF表达的机制尚不明确,故已成为妇科肿瘤研究热点。近两年,有关小分子RNA的研究异常活跃,并发现一些小分子RNA参与激素发挥作用,目前仅有几篇文章报道FSH与miRNA的作用关系,而FSH对小分子miR-27a表达的影响更未见报道。此外,有3篇文献显示,miR-27a通过miR-27a:ZBTB10-SP1信号枢纽,调控细胞生存和血管生成因子(Survivin、VEGF)的表达。因此,FSH是否也能通过该信号通路miR-27a:ZBTB10-SP1调控COX-2/Survivin、VEGF的表达,目前国内外尚无报道。目的：观察促卵泡激素(follicle-stimulating hormone, FSH)对上皮性卵巢癌细胞microRNA-27a基因,ZBTB10、SP1、COX-2/Survivin. VEGF蛋白的调节作用并证明这些分子间的上下游关系,探讨促卵泡激素是否通过microRNA-27a:ZBTB10-SP1信号途径促进炎症因子、生存素、血管形成因子(COX-2/Survivin. VEGF)的表达,继而介导上皮性卵巢癌炎症发生和血管生成。方法：1.本研究将假设的信号通路基因逐一进行阻断或过表达,运用TaqMan real-time PCR、免疫化学和Western blot技术,在基因或蛋白水平上检测处理因素对相关基因或蛋白产生的影响,进而推断这些分子的上下游关系,探索FSH是否通过miR-27a:ZBTB10-SP1信号枢纽调控上皮性卵巢癌细胞炎症因子、生存素和血管形成因子,包括COX-2/Survivn、VEGF的表达。实验技术路线见图1-1。2.统计分析：荧光定量PCR和凝胶显影后相对灰度值的结果以平均值士标准差(x±s)来表示。采用SPSS17.0统计学软件进行one way ANOVA分析,p<0.05视为差异有统计学意义,p<0.01视为有显著性差异。结果：1.除A2780细胞外,其他5株上皮性卵巢癌细胞与MOODY对照组相比,microRNA-27a基因表达均偏高；6株上皮性卵巢癌细胞株中SP1、ZBTB10蛋白表达存在差异,SP1在上皮性卵巢癌中表达高于ZBTB10。2.以HEY和HO8910细胞株为代表,促卵泡激素呈剂量依赖性调控microRNA-27a基因、ZBTB10和SP1蛋白的表达,其中FSH上调microRNA-27a和SP1的表达而下调ZBTB10的表达,并以终浓度50mIU/ml作用最佳；FSH上调COX-2/Survivin、VEGF表达。以下实验统一选取HEY、H08910作为实验细胞株,FSH选用50mIU/ml为工作浓度。3.细胞经anti-microRNA-27a、PZBTB10、SiSP1处理后均可以阻断FSH对COX-2/Survivin、VEGF表达的影响。同时加入anti-microRNA-27a后,ZBTB10表达增加,而SP1表达受到抑制,阻断FSH对ZBTB10, SP1调节作用；转染PZBTB10后,SP1表达受到抑制,阻断FSH对SP1表达调节作用；加入SiSP1后,阻断FSH促进COX-2/Survivin、VEGF的表达。结论：促卵泡激素通过刺激(?)icroRN A-27a:ZBTB10-SP1信号通路,促进上皮性卵巢癌细胞炎症因子、生存因子和血管生成因子COX-2/Survivin、VEGF的表达,进而诱导炎症效应和血管生成。