肝癌是一种常见的恶性肿瘤,临床常用的治疗方法有手术治疗、化学治疗、经皮瘤内注射治疗、放射治疗、免疫基因治疗、肝动脉栓塞治疗等。目前,瘤内注射治疗成为了肝癌临床治疗的研究热点,但普通注射剂瘤内注射给药后,大量药物会经过组织间隙渗漏进入体循环,导致肿瘤内局部药物浓度相对较低,治疗效果不是很理想。因此,为提高药物疗效,降低副作用,我们通过改变药物剂型,使其具有缓释效果,结合瘤内注射给药,使药物能长时间作用于肿瘤细胞,达到最佳治疗目的。PLGA微球(MS)作为能够缓释药物的剂型己被广泛应用,PLGA是合成的生物可降解的高分子材料,已经被FDA批准为药用辅料,在体内通过溶蚀降解达到缓释药物的作用,最终降解产物为水和C02,对人体无毒无害。因此,将抗癌药他米巴罗汀(Am80)制成PLGA微球注射剂,瘤内注射给药治疗肝癌,可提高肿瘤部位的药物浓度,延长药物在肿瘤局部的作用时间,减少给药次数。本课题以Am80为模型药物,采用O/W型乳化溶剂挥发法制备了瘤内注射用Am80-PLGA-MS,研究内容主要包括Am80-PLGA-MS的制备与理化性质的研究、Am80-PLGA-MS体外释药性及初步稳定性研究、Am80-PLGA-MS体内药物动力学研究、Am80-PLGA-MS瘤内注射治疗H22肝癌的药效学研究。1. Am80-PLGA-MS的制备与理化性质的研究首先,建立Am80-PLGA-MS包封率、载药量的测定方法并进行了方法学考察。然后,以粒径和包封率为评价指标,对处方及工艺因素进行单因素考察,找出影响Am80-PLGA-MS包封率和粒径的主要因素；采用正交设计优化处方和工艺：选择适宜的干燥方法制备注射用的Am80-PLGA-MS;最后,通过重现性试验,验证处方组成的合理性和工艺的稳定性；利用DSC法对Am80-PLGA-MS进行物相分析,验证Am80-PLGA-MS的形成；同时对Am80-PLGA-MS的外观形态、粉体学性质、粒径与粒度分布、包封率与载药量等理化性质进行评价。结果表明,采用超速离心、UV法测定Am80-PLGA-MS包封率和载药量,精密度、回收率高、重现性好,在4.4μg/mL-28.6μg/mL浓度范围内线性关系良好；采用乳化-溶剂挥发法制备Am80-PLGA-MS,该法制备的Am80-PLGA-MS平均粒径为(7.04±0.03)μm；包封率为(82.23±0.74)%；载药量为(11.74±0.11)%,表面光滑圆整,复溶速度快,满足瘤内注射的要求。2.Am80-PLGA-MS体外释药性及初步稳定性研究首先,建立了Am80-PLGA-MS体外释放度的测定方法并进行了方法学考察；然后,采用动态膜透析法,以含有1%的吐温、0.1%NaN3的pH 5.0的PBS为释放介质,以Am80溶液为对照,测定不同时间点Am80-PLGA-MS的体外释药情况,绘制释放曲线,通过数学模型对药物体外释放曲线进行拟合,考察Am80-PLGA-MS的体外释药规律；最后,通过影响因素试验考察Am80-PLGA-MS的初步稳定性,目的是为药品的包装、贮存、运输提供科学依据。结果表明,所建立的Am80-PLGA-MS含量测定方法,精密度、准确度高、稳定性好,在浓度4.4μg/mL-28.6μg/mL范围内线性关系良好,符合含量测定要求。体外释放试验结果表明,Am80原料在释放介质中释放较快,8h累积释放百分率达到(95.65±0.98)%；Am80-PLGA-MS释放缓慢,第1天(24h)累积释放百分率为(21.59±0.28)%,第7天累积释放百分率为(64.34±0.36)%,14天时累积释放百分率达到(96.17±1.49)%,缓释效果较好。影响因素试验结果表明,Am80-PLGA-MS制剂在40℃条件下不稳定,易结块,但药物含量变化不明显；在92.5%高湿度环境下放置,微球含量下降明显,而在湿度为75%的环境下微球的外观形态以及药物含量均无明显变化；在光照条件下微球微球外观及含量均无明显变化,表明微球应该在低温干燥的环境中贮存。3.Am80-PLGA-MS体内药物动力学研究首先,在昆明小鼠腋下接种对数生长期的H22肿瘤细胞,建立荷瘤小鼠H22肿瘤模型；然后,以荷瘤小鼠作为动物模型,以Am80增溶溶液为对照,分别瘤内注射Am80增溶溶液和Am80-PLGA-MS,通过测定不同时间点小鼠肿瘤部位的药物浓度和血浆中的药物浓度,比较两种制剂在肿瘤局部的药物量和渗漏进入体循环中的药物量。通过肿瘤部位药物浓度与时间关系求得药物动力学参数,以此评价Am80-PLGA-MS的缓释长效作用,探讨Am80-PLGA-MS局部用药的优势,为瘤内注射局部给药的研究提供新的思路。结果表明,瘤内注射给药后,在肿瘤组织内,微球组在各个时间点的药物浓度明显高于溶液组。药物动力学参数结果显示,与溶液组相比,微球组t1/2β和MRT明显延长,分别为溶液组的15.43倍和8.62；微球组AUC为溶液组的9.98倍,CL为溶液组0.09倍,微球组药生物利用度明显增高。在血浆中,溶液组的血药浓度水平远远高于微球组,药物溶液组的Cmax为7.588μg/mL是微球组的2.31倍。结果表明,Am80被包覆于微球后,能够减少Am80从肿瘤向体内血液循环的渗漏,降低药物全身吸收导致的毒副作用。4.Am80-PLGA-MS瘤内注射治疗H122肝癌的药效学研究首先,通过在昆明小鼠腋下接种对数生长期的H22肿瘤细胞建立小鼠H22肿瘤模型,以荷瘤小鼠为动物模型,以pH 5.0的PBS为对照,分别瘤内注射Am80增溶溶液和Am80-PLGA-MS,通过观察不同时间点的瘤体体积,计算肿瘤倍增时间(DT),抑瘤率(TGI),肿瘤特定生长率(SGR)评价各组药物对肿瘤生长的抑制作用；通过观察不同时间点的动物体重,评价药物的毒性；对不同时间点肿瘤组织HE染色,在显微镜下观察病理学特征,根据炎症、细胞的坏死情况以及肿瘤细胞的修复情况评价药物的疗效,以验证Am80-PLGA-MS在体内的药物活性以及缓释性。结果表明,微球组、溶液组均能不同程度的抑制肿瘤的生长,微球组的DT是溶液组的1.34倍,TGI是溶液组的2.63倍,SGR是溶液组的0.72倍,微球组对肿瘤的抑制作用明显强于药物溶液组。小鼠的体重变化不大,说明药物对小鼠的毒性较小。病理学结果表明,在相同剂量下,Am80-PLGA-MS组治疗效果更好。虽然在治疗初期,Am80溶液组疗效较Am80-PLGA-MS组好,但由于药物的半衰期短以及药物分子量小易通过组织扩散,使得Am80溶液组在肿瘤部位维持有效药物浓度时间短,而处于静止期的肿瘤细胞又重新增殖,此时Am80溶液组的药物浓度对肿瘤细胞已无法起到肿瘤抑制作用,而Am80-PLGA-MS组药物在肿瘤局部缓慢释放,延长了药物作用时间,因此治疗后期的效果远好于Am80溶液组。本文通过瘤内注射用Am80-PLGA微球的制备,体内外评价以及药效学研究,为瘤内局部给药治疗肝癌探索了新的思路和手段。