甘草次酸降低α-溶血素的表达以及其对金黄色葡萄球菌体内外致病性影响的研究

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金黄色葡萄球菌是一种常见的,可以引起人类医院获得性和社区获得性的革兰氏阳性菌,为条件致病菌。一般情况下定殖于健康人体的鼻腔之中,每当人体免疫机能下降时,便趁机侵袭机体,引起机体的多种疾病。如若感染动物机体,则能够引起牛羊坏疽性乳腺炎以及奶牛的乳房炎等疾病,对畜牧业同样造成了极大地危害。金葡菌肺炎在由金葡菌所引起的所有疾病中,高居第二位,并且具有极高的致死率,据统计,可高达24%-50%,在所有细菌性肺炎中是最高的。耐甲氧西林金葡菌的出现,以及传统抗生素研发的停滞,使得人类对治疗金葡菌感染愈发地捉襟见肘。因此,寻找新的抗菌机制,以及在全新机制下的抗生素研发就迫在眉睫。如抗细菌粘附,抗细菌通讯,以及抗细菌毒力因子的治疗策略引起了广大科研工作者的关注。特别是抗细菌毒力因子的治疗策略,更是关注的重中之重。金葡菌本身的致病性,与其所分泌的一系列具有致病性的毒力因子息息相关,这些毒力因子包括:血浆凝固酶、粘附素、脱氧核糖核酸酶、生物膜、生物被膜、溶血素、肠毒素、胞外毒素等。其中,金葡菌肠毒素可以引起食物中毒;中毒休克综合症毒素为机体超抗原,能够引起休克;而α-溶血素就是金葡菌性肺炎的主要致病因子。金黄色葡萄球菌能产生多种损伤细胞膜的溶血素。按照它们的其抗原性不同可将其四种,分别是α、β、γ、δ四种,其中,致病性最强的溶血素是α-溶血素。α-溶血素是一种穿孔毒素,能够裂解机体多种细胞。α-溶血素做为一种毒力因子在为金葡菌感染中所发挥的重要作用。而且,α-溶血素在金黄色葡萄球菌株中有着高度的保守性,因此,α-溶血素也具有非常好的的抗原性,由于α-溶血素具有上述特点,以其为靶标研发抗金葡菌感染的药物就有着极其深远的意义。本文首先研究了甘草的主要活性成分-甘草次酸对金葡菌生长的影响情况,发现,甘草次酸对金黄色葡萄球菌的生长并没有抑制作用。我们又进行了溶血素活性测定、免疫印迹分析和荧光定量PCR等一系列的实验,证明了甘草次酸具有降低金葡菌α-溶血素分泌的作用,并发现其降低了α-溶血素基因hla以及其主要调控基因RNAⅢ的表达水平,说明甘草次酸有可能是通过抑制了hla和RNAⅢ的表达从而下调了α-溶血素的表达量。我们将金葡菌与肺上皮细胞共培养,然后在体系中加入甘草次酸,通过live/dead和LDH释放这两个实验观察以及测定了A549细胞的损伤情况,发现甘草次酸能够缓解由金葡菌引起的对人肺上皮细胞A549细胞的损伤。动物实验结果表明,甘草次酸能够降低小鼠金葡菌性肺炎的死亡率。在体内,进一步验证了甘草次酸对小鼠金葡菌性肺炎所具有的保护作用。
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