糖尿病骨质疏松中医证型及滋肾降糖丸干预作用研究

来源 :广州中医药大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:oldfan48
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目的:一、临床研究部分:本部分研究通过对糖尿病骨质疏松(DOP)患者的中医证型及临床资料进行回顾性分析,旨在初步揭示糖尿病骨质疏松患者的中医证型特点及与临床资料的关系,为更好地辨证论治该病、提高临床疗效提供参考。二、实验研究部分:本部分研究在前期研究发现滋肾降糖丸可通过调控Wnt/?-catenin通路防治糖尿病骨质疏松及miRNA对Wnt/?-catenin通路调控作用的基础上,通过观察滋肾降糖丸对糖尿病模型大鼠糖代谢、骨代谢、骨密度及骨组织中靶向Wnt/?-catenin信号通路的miRNA的干预作用,旨在进一步探讨滋肾降糖丸可能通过miRNA靶向Wnt通路从而防治糖尿病骨质疏松的机制,为滋肾降糖丸防治糖尿病骨质疏松提供新的理论依据。方法:一、临床研究部分:采用回顾性调查研究方法,选取2013年1月至2017年12月期间于深圳市中医院住院治疗的符合条件的糖尿病骨质疏松患者为研究对象。根据其入院时的主要临床症状以及舌脉象按照辨证分型标准统一重新进行辨证分型,并记录其性别、年龄、身高、体重、体重指数(BMI)、糖尿病病程、骨折史、空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血钙、血磷、骨密度(BMD)等临床资料,最后对辨证分型结果及临床资料进行统计学分析。二、实验研究部分:采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型,随机分为模型组、中药组,各治疗组分别给予相应药物灌胃治疗,另设正常对照组,每组8只。干预12周后,观察各组大鼠空腹血糖、糖化血红蛋白、血钙、血磷、骨钙素(OC)、?-I型胶原羧基端肽(?-CTX)、骨密度等指标变化情况。同时,运用高通量测序技术检测并筛选骨组织差异性表达的miRNA,利用生物信息软件预测其下游靶基因,然后筛选出靶向Wnt/?-catenin信号通路的miRNA。最后运用实时定量PCR(qPCR)方法验证筛选出的靶向Wnt通路差异表达的miRNA。结果:一、临床研究部分:(一)本次研究共收集到127例符合条件的DOP患者,其中男性54例(42.5%),女性73例(57.5%),男女比为0.74:1;患者平均年龄66.58岁,年龄主要集中在50-79岁(93.7%)间,平均糖尿病病程9.02年,平均BMI21.05kg/m~2;患者中曾有骨折史的有34例(26.8%),无骨折史的有93例(73.2%);患者平均骨密度-3.07,平均FPG8.86mmol/L,平均HbA1c7.64%,平均血钙2.26mmol/L,平均血磷1.13mmol/L。(二)127例患者证型中阴阳两虚最多,共40例(31.5%),其次是气滞血瘀37例(29.1%)、肝肾亏损26例(20.5%)、脾肾阳虚挟瘀14例(11.0%),最少的证型为肾精不足10例(7.9%)。对证型作合并处理后,结果显示肾虚型(肝肾亏损+肾精不足+脾肾阳虚挟瘀+阴阳两虚)较多,共90例(70.9%),非肾虚型(气滞血瘀)共37例(29.1%)。(三)肾虚型与非肾虚型患者比较,二者性别、BMI、FPG、HbA1c、血钙、血磷、骨折史无显著性差异(P>0.05),而年龄、糖尿病病程、BMD有显著性差异(P<0.05),且肾虚型患者比非肾虚型患者平均年龄更大、平均糖尿病病程更长、平均BMD更低。回归分析结果则显示,年龄和糖尿病病程是肾虚证型的独立影响因素。二、实验研究部分(一)与正常组相比,模型组大鼠FPG、HbA1c、血钙、血磷明显升高(P<0.01);与模型组比较,中药组大鼠FPG、HbA1c、血钙、血磷明显降低(P<0.01)。(二)与正常组相比,模型组大鼠?-CTX明显升高(P<0.01);与模型组比较,中药组大鼠?-CTX明显降低(P<0.01)。与正常组相比,模型组大鼠OC明显降低(P<0.01);与模型组比较,中药组大鼠OC明显升高(P<0.01)。(三)与正常组相比,模型组大鼠BMD明显下降(P<0.01);与模型组比较,中药组大鼠的BMD明显増加(P<0.05)。(四)Clean tag长度分布结果显示正常组、模型组和中药组三组的峰值均集中在22nt。差异表达miRNA筛选结果显示MOD/NOR找到2个显著上调的miRNA,426个显著下调的miRNA;ZSW/MOD找到35个显著上调的miRNA,141个显著下调的miRNA。同时满足MOD/NOR下调而ZSW/MOD上调或MOD/NOR上调而ZSW/MOD下调,筛选得到7个符合条件的miRNA。对上述符合条件的miRNA运用生物信息软件预测其下游靶基因,最后筛选得到5个靶向Wnt/?-catenin信号通路的miRNA。(五)qPCR验证结果显示miR-26a-5p在模型组中的表达相比正常组上调(P<0.05),在中药组的表达相比模型组下调(P<0.05);miR-200c-3p在模型组表达相比正常组上调(P<0.05),在中药组的表达相比模型组下调(P<0.01);miR-124-3p在模型组的表达相比正常组下调(P<0.01),在中药组的表达相比模型组上调(P<0.05);miR-151-5p、miR-138-5p组间表达差异均不显著(P>0.05)。结论:一、临床研究部分:糖尿病骨质疏松患者证型以阴阳两虚相对较多,其次是气滞血瘀、肝肾亏损、脾肾阳虚挟瘀、肾精不足,而合并证型整体分析后则显示以肾虚证型为多,且肾虚型患者比非肾虚型患者的年龄更大、糖尿病病程更长、骨密度更低,其中年龄和糖尿病病程是肾虚证型的独立影响因素。二、实验研究部分:滋肾降糖丸可以改善糖尿病模型大鼠的糖代谢、骨代谢,提高骨密度,具有防治糖尿病骨质疏松的作用。滋肾降糖丸可能通过下调靶向Wnt通路的miR-26a-5p、miR-200c-3p以及上调靶向Wnt通路的miR-124-3p对Wnt通路进行调控,进而影响成骨分化的过程,最终实现防治糖尿病骨质疏松的作用。
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