人参锈腐病颉颃菌的筛选及鉴定

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本研究于2004年至2005年,从吉林省的集安、靖宇和抚松三地采集人参根际土样135份,从中分离出真菌45株、细菌67株、放线菌221株,对人参根际的微生物数量变化进行了研究。 研究主要包括人参根际不同年限和不同深度土壤中的微生物数量变化趋势。研究结果发现,随着栽参年限的增加,人参根际土壤中微生物数量也随之减少,其中新林土中的微生物数量最多,老参地中最少;3年与5年根际土壤中微生物数量降低幅度较新林土和1年土壤中的微生物数量降低幅度要大。对不同深度人参根际土壤中微生物数量变化研究表明,随着深度的增加,土壤微生物数量呈下降的趋势,其中0~5cm与5~10cm土层间的降低幅度要高于5~10cm与10~15cm土层间;不同年限同一土层的土壤中,微生物数量不完全遵循下降的趋势。 对分离出的45株真菌、67株细菌、221株放线菌与人参锈腐病菌进行了颉颃试验,结果发现,45株真菌对人参锈腐病菌完全没有颉颃作用;67株细菌中仅有2株有颉颃作用,但是作用不大且效果很不稳定;221株放线菌中有11株颉颃效果较好,据此对这11株放线菌进行再次筛选。对这11株放线菌进行液体培养,取其发酵液对锈腐病菌进行颉颃试验,计算抑菌率,从中选出颉颃效果最好的菌株JY36。 对菌株JY36的液体培养条件进行了初步研究,主要研究培养基种类、温度、pH和培养时间对其抑菌效果的影响;在此基础上对培养条件进行4因素3水平正交试验,最终确定了JY36的最适液体培养条件:培养基为玉米粉大豆粉培养基、温度为30℃,pH9,培养时间为120h。 对该株放线菌进行了形态学观察和部分生理生化反应的测定,并对16S rDNA序列进行了测定。形态学观察得出此株放线菌具有典型的链霉菌属的特征,证实其为链霉菌属的一个种。 生理生化反应测定结果为:菌株JY36使明胶液化,不产生H2S,牛奶不凝固胨化,淀粉水解;可以利用D-葡萄糖、D-木糖、D-果糖、蔗糖、棉子糖、肌醇作为碳源。 对JY36的16S rDNA序列测定,其核苷酸序列长度为1264bp,将所测序列与从GenBank数据库中的同源性高的50个链霉菌属放线菌序列进行比较,菌株JY36与李色链霉菌Streptomyces prunicolor的16S rDNA序列100%相似,可以确定其为S.prunicolor。
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