实验性大鼠羊水栓塞后肺组织TPS和CK16表达的变化及意义

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目的:本实验通过复制AFE大鼠动物模型,在注入不同剂量羊水原液和胎粪混合液引起AFE后,应用类胰蛋白酶(TPS)和角蛋白16(CKl6)免疫组织化学方法观察羊水栓塞大鼠的肺组织,来研究肥大细胞被激活后TPS量的变化和肺组织内中CK16表达的变化,探讨肥大细胞参与AFE的病理过程及在AFE中的作用,探讨TPS和CK16在AFE死亡法医学鉴定中的意义。方法:选用待产的雌性wistar大鼠50只(由第三军医大动物中心提供)。随机分为3组,分别为对照组(10只,生理盐水,NS),羊水组(30只,AF),胎粪组(10只,MAF)。建立羊水栓塞动物模型。观察一定时间后取肺组织,做常规HE染色和免疫组化做形态学观察。结果:(1)给动物注射不同剂量的羊水原液和胎粪混合液。实验中发现按照3.75m1/kg、2.50m1./kg和1.25m1/kg的标准,静脉注射羊水原液时,大鼠可以存活的时间有明显差异。按1.25ml/kg注射羊水原液时,动物可以存活1~2h,只有轻微症状;按2.5m1/kg静脉注射羊水原液时,大鼠存活0.5~1h:按照3.75ml/kg注射羊水原液时,大鼠一般在0.5h内死亡。按2.5m1/kg静脉注射1%的胎粪,动物出现的症状会更早,症状会更急,常常在15~30min内死亡。(2)取肺组织做HE染色,对照组未见明显病理改变。实验组(AF和MAF)的肺组织有不同程度的水肿,血管扩张。肺小血管及肺泡壁毛细血管可见无结构角化上皮组织、黄色无定形物质(胎粪)及毳毛、粘液等羊水成分。有的毛细血管内可见透明血栓形成,肺实质可见少量出血。在羊水组中血管及支气管周围可见大量炎性细胞浸润,有白细胞(主要为嗜酸性粒细胞)和巨噬细胞。胎粪组的肺组织可见明显的黄色胎粪。(3)TPS免疫组化染色阴性对照组见少量阳性染色细胞,AF和PAF组TPS染色阳性细胞明显增多,棕色颗粒存在于细胞浆中。高倍镜下可以看到在肥大细胞周围有弥散性的TPS染色阳性的颗粒,显示肥大细胞的脱颗粒效应。MAF组TPS量明显多于AF组,P<0.05(见表1)。(4)肺组织CKl6免疫组化:对照组少见阳性染色物质,AF和MAF组有大量CK16染色呈阳性,呈棕色丝状,存在于肺动脉或肺泡周围毛细血管中,部分肺泡壁也有表达。镜下观察到随着注射量的升高,CK16染色阳性的分布增多,且染色更深。结论:在这种动物模型中,实验结果提示:羊水原液入血的量和成分决定了AFE的症状;确认AFE时肺组织内有大量CK16表达,同时肥大细胞发生了脱颗粒反应,TPS阳性物质释放,TPS的表达明显升高。检测患者体内TPS的变化可能对确诊AFE有很大的帮助。
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