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癌症是影响人类寿命的主要公共卫生问题之一,目前化疗还是治疗癌症的重要方法。但化疗药物靶向性差、溶解性差、毒副作用大等问题并没有得到很好的解决。此外,长期的药物治疗,会使癌细胞逐渐产生多药耐药性,进一步降低了临床疗效,而这也是化疗药物目前面临的最严峻的问题。研究发现:在联合使用多种化疗药的治疗模式下,因不同药物作用机制不同,可极大的杀死多药耐药肿瘤细胞;纳米体系可以增加药物的溶解性,并降低药物的毒性;主动靶向配体可以显著增强药物的靶向选择性。鉴于此,本课题设计并制备了叶酸(Folate,FA)靶向纳米粒共载阿霉素(Doxorubicin,Dox)和姜黄素(Curcumin,Cur)。纳米粒经静脉注射后通过FA主动靶向作用到达肿瘤细胞,Dox抑制癌细胞复制生长,Cur缓解癌细胞多药耐药能力;该纳米粒的材料是具有高稳定性和高生物相容性的星状聚酯材料(Tri-CL);以肿瘤细胞表面过表达的叶酸受体为靶点,使用叶酸作为主动靶向配体对Tri-CL进行进一步修饰,合成接枝FA的星状高聚物(FA-Tri-CL)。具体实验方案如下:(1)FA接枝的星状高聚物FA-Tri-CL合成:以1,2,3-丙烷三甲酸为核心,ε-己内酯为聚合单体,通过开环聚合反应制备星状高聚物再将FA与Tri-CL通过酰胺化反应进行接合,得到FA接枝的星状高聚物FA-Tri-CL。经傅立叶红外光谱法(FT-IR)和核磁共振氢谱法(~1H-NMR)验证FA-Tri-CL结构。(2)Dox和Cur共载的FA靶向纳米粒(Dox+Cur)-FA-NPs的制备:采用溶剂挥发法制备纳米粒。(1)考察药物浓度比、药/材质量比、油/水体积比这三种因素对纳米粒特性的影响。将设计合成的载体材料FA-Tri-CL和药物按一定比例溶解于丙酮,作为油相,以0.5%泊洛沙姆188(Poloxamer,188P188)作为水相。通过单因素考察法得到最优处方为:药物浓度为Dox 1.0 mg/m L:Cur 1.0 mg/m L、药/材质量比为1:12.5和油/水体积比为1:10。最佳参数条件下制备得到的纳米粒(Dox+Cur)-FA-NPs的粒径为(187.4?1.77)nm,多分散指数PDI为(0.044?0.029),Zeta电位为(-18.3?0.9)m V,Dox包封率为(77.7?0.4)%和Cur包封率为(96.4?1.3)%,Dox载药量为(15.0?0.6)%和Cur载药量为(19.9?1.1)%。(2)透射电子显微镜实验结果表明,纳米粒(Dox+Cur)-FA-NPs为均一圆形,其粒径与马尔文粒径结果较为一致。(3)X射线衍射结果表明,Dox和Cur均被包封于纳米粒之中,而非吸附在纳米粒表面。(4)体外药物释放实验表明(Dox+Cur)-FA-NPs具有缓释性能,且Dox和Cur释放量在p H=6.8比p H=7.4的条件下释放更多。(5)体外稳定性结果表明,(Dox+Cur)-FA-NPs可在水溶液中稳定保存15天,在含10%FBS的DMEM溶液中稳定保存48 h。(3)纳米粒安全性及体外抗肿瘤研究:用MTT法考察纳米粒的安全性,结果表明空白纳米粒(Blank-NPs和Blank-FA-NPs)对L929细胞均具有很好的生物安全性;体外抗肿瘤试验表明:Dox和Cur的联合使用可以一定程度上缓解MCF-7/ADR细胞(耐药株)的耐药性,同时(Dox+Cur)-FA-NPs和(Dox+Cur)-NPs可以增加Dox和Cur的溶解性从而增强抗增殖作用;流式细胞实验证明了MCF-7/ADR细胞有外排机制,可降低细胞内Dox的浓度,Dox和Cur的联合使用可以部分抑制MCF-7/ADR细胞外排,此外(Dox+Cur)-NPs和(Dox+Cur)-FA-NPs可以一定程度促进药物进入细胞。不同载体促进药物入胞效率顺序如下:(Dox+Cur)-FA-NPs>(Dox+Cur)-NPs>(Dox+Cur)。(4)小动物成像体内荧光分布实验:该实验证明了(Dox+Cur)-FA-NPs组中FA的接枝能够协助纳米粒精准的将药物递送到肿瘤部位,相较于其它组具有更好的肿瘤靶向性。(Dox+Cur)-FA-NPs也有助于减少药物在心脏、肝脏等重要脏器的蓄积,降低重要器官的损伤。总之,本课题研究开发的Dox和Cur共载叶酸靶向纳米给药体系具有制备简单、储存稳定的特点;Dox和Cur的联用有效缓解了MCF-7/ADR癌细胞的多药耐药性;该纳米体系有效降低了药物的毒性,同时叶酸的接枝增加了体系的靶向性。因此,在该Dox和Cur共载叶酸靶向纳米给药体系在抗肿瘤领域是一种具有潜在临床应用前景的给药体系。