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细胞凋亡发生于所有的肿瘤组织中,与肿瘤的发生、发展及转移密切相关。化疗药物主要通过诱导癌细胞凋亡达到治疗效果,因此,诱导肿瘤细胞凋亡成为研究肿瘤治疗的热点。具有选择性广、毒副作用小,耐药性低的天然药物是中药研究抗肿瘤的重要方向。紫杉醇是一种新型天然广谱抗肿瘤药物,其诱导凋亡的机制主要是通过抑制细胞有丝分裂,使细胞阻滞于G2/M期,从而阻断正常的有丝分裂和细胞增殖。犬乳腺肿瘤是兽医临床常见的一种肿瘤性疾病,紫杉醇在犬乳腺肿瘤方面作用的研究国内外尚无报道,并且犬与人类的关系密切,所处环境和致癌原因也极其相似,因此用犬来作为肿瘤的模型并对其进行研究,探讨紫杉醇诱导动物肿瘤细胞的抗癌机制,对今后治疗动物的肿瘤及人类癌症治疗方案的制定有着非常重要的意义。本课题以体外培养犬乳腺肿瘤细胞系CHMm株为模型,加入不同浓度的紫杉醇进行处理,于培养后24、48、72h分别对细胞增殖、细胞毒性作用和细胞形态学变化以及SOD、CAT、MDA等抗氧化功能因子进行测定,分析其作用时间-剂量效应关系,探讨紫杉醇诱导细胞凋亡的形态学变化及抗氧化功能的变化,为更进一步研究紫杉醇诱导犬乳腺肿瘤细胞凋亡机制以及为临床应用紫杉醇治疗癌症提供更可靠的实验数据。实验结果表明:1.通过MTT比色法和台盼兰排斥实验检测了紫杉醇对犬乳腺肿瘤细胞生长的变化,结果表明随着紫杉醇浓度增加,培养时间延长,抑制率逐渐上升,细胞活性逐渐下降,具有时间-剂量依赖性;通过乳酸脱氢酶活性的测定,结果显示在同一时间点,不同浓度的紫杉醇组间差异均极显著(P<0.01);在不同时间点,24h1μmol/L的紫杉醇与48h0.1μmol/L的紫杉醇与72h0.01μmol/L的紫杉醇比较不显著(p>0.05),其他各组间比较差异均极显著(P<0.01),表明紫杉醇能够损伤犬乳腺肿瘤细胞胞膜的完整性,影响DNA和RNA合成,增加犬乳腺肿瘤细胞内的LDH漏出率,LDH活性增加,发挥细胞毒性作用,具有时间-浓度依赖性。2.应用倒置显微镜下观察犬乳腺肿瘤细胞生长情况;AO/EB双荧光染色荧光显微镜下和透射电镜下观察犬乳腺肿瘤细胞凋亡的形态学变化。表现为对照组细胞完整,细胞分布均匀,内可见多个细胞核,核仁大而明显,微绒毛和内质网丰富,染色质分布均匀;实验组细胞质浓缩、染色质凝集、细胞膜表面微绒毛消失,胞质内有许多空泡样变,凋亡小体形成,线粒体膜不完整,肿胀。结果表明紫杉醇可以诱导犬乳腺肿瘤细胞发生凋亡,并且随着时间推移和药物浓度的增加凋亡加剧。3.用不同浓度的紫杉醇作用于犬乳腺肿瘤细胞在不同时间下,表现为细胞内MDA含量逐渐升高,对照组与各实验组比较极显著(p<0.01);SOD的活性降低,且CAT活性的变化与其SOD变化趋势很相近,具有时间-浓度的依赖性。