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背景与目的: 帕金森病(Parkinsons disease，PD)是一种常见的神经系统退行性疾病，平均发病年龄60岁，60岁以上发病率约1％，全球已有超500万患者。PD的主要临床症状有静止性震颤、运动迟缓、肌强直、步态和姿势平衡障碍等，发病后期可致残。PD的主要病理改变是中脑黑质部中多巴胺(DA)能神经元死亡。PD是由多种因素引起的疾病，它与遗传因素、环境因素、年龄、线粒体、自噬等相关，但其具体的病因及其机制目前还未完全明确，有待深入研究。目前临床上仍然没有有效的方法进行PD的早期诊断，因此研究PD的发病机制对于PD的诊断和治疗是至关重要的。炎症参与了PD的发病，而胶质细胞的组织蛋白酶B(Cathepsin B，CTSB)参与了神经系统炎症的发生发展，所以CTSB可能参与PD的发生发展。 MicroRNAs(miRNAs)是一种内源性的长度21-23个核苷酸单链小分子RNA，它通过与靶基因信使RNA(mRNA)的3非翻译区(3UTR)结合诱导沉默复合体降解mRNA或阻碍其翻译，对真核细胞的基因表达、细胞发育分化和个体发育等多方面起调控作用。有研究发现PD患者血清中miR-214-3p的量显著下调，但是miR-214-3p在PD发生发展中的调控作用有待进一步阐明，其对PD发病机制的研究以及治疗方法的创新具有重要意义。通过生物信息学分析发现CTSB基因可能是miR-214-3p的靶基因，而miR-214-3p调控CTSB蛋白与PD是否相关国内外鲜有报道。本研究以BV2细胞和U87MG细胞作为小胶质细胞与星形胶质细胞的代表，SH-SY5Y细胞是研究PD常用的细胞模型，再将miR-214-3p导入胶质细胞，以探索miR-214-3p是否调控胶质细胞CTSB蛋白降低多巴胺能神经元活力。本课题组在胶质细胞中过表达miR-214-3p，再使用药物1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)刺激，观察CTSB表达与miR-214-3p的变化情况，最后收集胶质细胞的条件培养基(CM)去培养多巴胺能神经元，检测多巴胺能神经元活力。本项研究将阐明miR-214-3p调控胶质细胞CTSB蛋白对多巴胺能神经元活力的影响，为PD的临床治疗提供一定的实验支持。 材料与方法: 第一部分 miR-214-3p可结合CTSB mRNA的3UTR 1.重组GP-miRGLO-CTSB野生型质粒和GP-miRGLO-CTSB突变型质粒。 2.CTSB的野生型质粒和突变型质粒分别与miR-214-3p的Mimics、NC、Inhibitor及Inhibitor NC共转染HEK293T细胞进行荧光素酶报告基因实验。 3.将不同剂量的miR-214-3p Mimics与相同剂量的野生型质粒共转染HEK293T细胞进行荧光素酶报告基因实验。 4.统计学分析:所有数据均由SPSS21.O统计软件处理，定量资料应用均数±标准差(Mean±SD)表示;多组均数的比较使用单因素方差分析(ONE ANOVA)，并利用LSD-t法进行组间比较;以a=0.05为显著性检验水准。 第二部分 miR-214-3p调控胶质细胞（小胶质细胞和星形胶质细胞）CTSB蛋白影响多巴胺能神经元活力的研究 1.miR-214-3p的Mimics、NC、Inhibitor及Inhibitor NC分别转染BV2细胞和U87MG细胞后，内源性蛋白进行Western Blotting。 2.MPP+单独刺激BV2细胞和U87MG细胞后利用Western Blotting和qRT-PCR分别检测蛋白和RNA的变化。 3.miR-214-3p与MPP+共同作用BV2细胞和U87MG细胞后，用WesternBlotting和qRT-PCR检测蛋白和RNA的变化。 4.miR-214-3p与MPP+共同作用BV2细胞和U87MG细胞后，分别收取CM培养SH-SY5Y细胞，再利用化学发光法进行细胞活力检测。 5.统计学分析:所有数据均由SPSS21.0统计软件处理，定量资料应用均数±标准差(Mean±SD)表示;多组均数的比较使用单因素方差分析(ONE ANOVA)，并利用LSD-t法进行组间比较;以α=0.05为显著性检验水准。 结果: 1.验证了CTSB是miR-214-3p的靶基因。 2.miR-214-3p以浓度依赖的方式调控CTSB表达。 3.与miR-214-3p的NC、Inhibitor、Inhibitor NC相比miR-214-3p Mimics能够下调BV2细胞和U87MG细胞中的CTSB蛋白（P＜0.05）。 4.MPP+单独刺激分别使BV2细胞和U87MG细胞中的CTSB蛋白水平显著升高，但对CTSB的mRNA水平影响不明显，只有BV2细胞的miR-214-3p表达水平明显下降。 5.miR-214-3p与Mpp+共同作用BV2细胞和U87MG细胞，miR-214-3p能逆转Mpp+引起上调的CTSB蛋白，但CTSB的mRNA无显著性变化。 6.miR-214-3p与MPP+共同作用BV2细胞和U87MG细胞，两种细胞的CM都能降低SH-SY5Y细胞活力。 结论: 1.miR-214-3p能够调控胶质细胞中CTSB基因的表达。 2.MPP+能够使胶质细胞中的CTSB蛋白表达升高。 3.静息或激活的胶质细胞内过表达miR-214-3p得到的条件培养基均使多巴胺能神经元活力明显下降。