补益肝肾法对小鼠皮肤α-MSH表达及黑素合成影响研究

来源 :成都中医药大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:wangyuan1984
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目的:以圣愈汤为基础,加菟丝子、泽泻而成的祛斑汤具有补益肝肾、益气养血的功效,临床用于治疗黄褐斑,疗效显著。观察不同剂量祛斑汤对雌性C57BL/6J小鼠皮肤中α-黑素细胞刺激素(α-MSH)表达和黑素分布的影响,了解该方剂是否通过降低α-MSH表达来抑制黑素合成;观察不同剂量祛斑汤对雌性C57BL/6J小鼠皮肤中两种黑素即优黑素和褐黑素含量的影响,了解该方剂在抑制黑素合成的过程中对两种黑素作用的差异。为深入探索该方剂治疗黄褐斑机制提供实验依据。方法:选择对体外培养的A375人黑素瘤细胞具有抑制细胞增殖、降低酪氨酸酶活性的方剂祛斑汤,配成低、中、高不同浓度。以雌性C57BL/6J小鼠为实验动物,随机分成5组,分别为祛斑汤低、中、高剂量组、阳性对照组和空白对照组。低、中、高剂量组每只小鼠按0.2ml/10g于每日灌服相应浓度中药1次,阳性对照和空白对照组为等量维生素C液和蒸馏水。30日后皮肤取材。采用免疫组织化学染色方法观察皮肤α-MSH表达和黑色素分布,并用x2检验和单因素方差分析进行统计学分析;采用酶联免疫吸附试验测量皮肤优黑素和褐黑素含量,并用单因素方差分析进行统计学分析。结果:1.祛斑汤对C57BL/6J小鼠皮肤α-MSH表达影响:免疫组织化学染色结果显示:光学显微镜下α-MSH表达定位于小鼠表皮角质形成细胞和毛囊黑素细胞胞浆或细胞外基质,为黄色或棕黄色或深棕色颗粒。空白对照组α-MSH阳性表达率为70%,祛斑汤高、中、低剂量组、阳性对照组α-MSH阳性表达率分别为20%、50%、60%、40%。祛斑汤高剂量组与空白对照组β-MSH表达比较,差别有统计学意义(P<0.01)。2.祛斑汤对C57BL/6J小鼠皮肤黑素分布影响:免疫组织化学染色结果显示:光学显微镜下各组小鼠毛囊基底细胞团中均可见黑素颗粒。黑素颗粒阳性反应的黑素细胞为阳性细胞。空白对照组阳性细胞平均光密度0.35,高于其他组。祛斑汤高、中剂量组阳性细胞平均光密度分别为0.26、0.28,与空白对照组比较,差别有统计学意义(P<0.01)。3.祛斑汤对C57BL/6J小鼠皮肤优黑素和褐黑素含量影响:酶联免疫吸附试验结果显示:各组优黑素含量比较,祛斑汤各剂量组与阳性对照组优黑素含量均低于空白对照组。祛斑汤高剂量组与空白对照组间差别有统计学意义(P<0.01)。各组褐黑素含量比较,祛斑汤各剂量组与阳性对照组褐黑素含量均高于空白对照组。祛斑汤高、中、低剂量组与空白对照组比较,差别有统计学意义(P<0.01)。结论:1.祛斑汤能降低雌性C57BL/6J小鼠皮肤中α-MSH表达、抑制黑素合成,α-MSH是影响皮肤和毛发颜色的重要因素。2.祛斑汤在抑制黑素合成过程中主要减少优黑素的生成,并促进优黑素向褐黑素转化。
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