目的:急性肺损伤(ALI)是临床上高病死率的急危重症,作为其治疗手段的机械通气(MV)又常引起呼吸机相关肺损伤(VILI)及呼吸机相关性肺炎(VAP),造成二次损伤,进一步引起ALI加重。1600 k Da的高分子量透明质酸(HMWHA)可以抑制肺部炎症,有望作为ALI治疗药物。但1600 k Da的HMWHA在市场上仍有空白,相近分子量区间的HMWHA价格十分高昂,因此本实验旨在以价格低廉的宽分布分子量HMWHA为起点,通过进一步的分离纯化,得到窄分布的1600 k Da HMWHA,并通过MV协同低分子量透明质酸(LMWHA)的促炎作用构建体内和体外ALI模型,在该模型上验证所得HMWHA产品的作用,进一步保证分离纯化方法的可行性。方法:(1)分离纯化方法:分别使用半制备液相色谱法、高压均质法和凝胶过滤层析法来分离出分子量约为1600 k Da的HMWHA,以分子量大小、分子量分布和方法稳定性等为指标,确定最佳分离方法及条件参数;(2)动物实验:先通过气道内雾化给药LMWHA协同MV建立大鼠ALI模型,在该模型基础上提前气道雾化给药分离所得不同分子量HMWHA(1500 k Da、1600 k Da、1800k Da),收集各组大鼠肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF),以总细胞和中性粒细胞计数,肺组织包埋切片HE染色后观察病理学变化,实时荧光定量PCR(q PCR)检测肺组织细胞炎性因子与趋化因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α和KC的m RNA表达量,酶联免疫吸附(ELISA)检测IL-1β、IL-6的蛋白表达量变化为指标,验证分离所得HMWHA对ALI预防治疗的有效性,进而确保所采用分离方法的可行性;(3)细胞实验:以LMWHA处理6 h为模型组,提前给药不同分子量HMWHA为治疗组,另设空白对照组,给药处理完毕后同样用q PCR检测细胞炎性因子和趋化因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α和KC的m RNA表达量,ELISA检测IL-1β、IL-6的蛋白表达量,通过体外实验结果进一步验证产品HMWHA的有效性,分离方法的可行性。结果:(1)与半制备液相色谱和高压均质法相比,凝胶过滤层析可得到最接近1600 k Da的HMWHA,且分子量分布较窄,方法和条件稳定;(2)与对照组相比,MV组和MV+LMWHA组大鼠BALF中细胞总数和中性粒细胞数显著上升,各炎性因子和趋化因子的m RNA表达量与蛋白表达量也显著升高,肺部病理切片显典型ALI形态学特征,其中MV+LMWHA组上升趋势更明显,与MV组具有显著性差异;(3)与MV+LMWHA的模型组相比,不同分子量的MV+HMWHA组大鼠BALF中细胞总数和中性粒细胞数显著下降,各炎性因子和趋化因子的m RNA表达量与蛋白表达量显著降低,肺部病理切片显示肺组织结构清晰完整,炎性细胞浸润减少;(4)细胞实验中所得各炎性因子和趋化因子的m RNA表达量与蛋白表达量变化趋势和动物实验保持一致。结论:(1)凝胶过滤层析法作为分离分子量窄分布的1600 k Da HMWHA的方法切实可行,另得到1500 k Da和1800 k Da的HMWHA副产品,该方法条件参数稳定,且可根据需要进一步优化并线性放大;(2)高通气量MV可引起肺部损伤,LMWHA会进一步诱导并加重肺部炎症,导致ALI的发生发展;(3)HMWHA对ALI具有预防治疗作用,可显著缓解肺部的炎症损伤,且除1600 k Da的HMWHA以外,1500 k Da和1800 k Da的HMWHA也有近似的治疗作用,可推测HMWHA对ALI的治疗效果存在一定的分子量区间。