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目的:
1.观察钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ (Calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMK Ⅱ)抑制剂KN-93对神经病理性疼痛大鼠热痛觉过敏的影响,研究KN-93在脊髓水平是否具有抗神经病理性疼痛的作用。
2、观察钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)抑制剂KN-93对脊髓背角pCREB表达的影响,探讨KN-93对慢性神经病理性疼痛的作用机制。
方法:采用健康雄性Wistar大鼠32只(体重:180-220g),随机分为4组(n=8),A组:假手术组+DMSO切皮前一小时鞘内注射5%二甲基亚砜(DMSO)10μl: B组:假手术组+KN-93切皮前一小时鞘内注射KN-93 10μl(50 μg溶于5%二甲基亚砜10μl中); C组: CCI组+DMSO切皮前一小时鞘内注射5%DMSO l0μl; D组:CCI组+KN-93切皮前一小时鞘内注射KN-9310μl(50 μg溶于5%二甲基亚砜l0μl中)。实验分两部分进行,第一部分各组分别在术前和术后3天用热痛刺激仪测定各组大鼠术侧热痛敏实验潜伏期(PWL)及基础值:第二部分术后4天和7天各组随机处死4只大鼠,取大鼠L4-5脊髓段进行免疫组织化学染色,对脊髓背角pCREB染色阳性神经元进行记数分析。
结果:第一部分,各组术后3天热痛敏阈值(PWL)与术前基础值比较均有不同程度减少,其差异有统计学意义(P<0.05);术后3天C组与其他三组比较PWL值明显减少,其差异亦有统计学意义(P<0.05), A、B、D三组组间比较PWL值无统计学意义(P>0.05)。第二部分,术后4天与7天四组免疫组化分析结果比较:C组脊髓背角pCREB表达最强,与其他三组比较明显增强(P<0.05),A、B、D三组组间比较pCREB表达无统计学意义(P>0.05)。
结论:1、鞘内预注射KN-93能明显减轻慢性坐骨神经松结扎大鼠热痛敏,提示钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN-93在脊髓水平具有抗神经病理性疼痛的作用。2、鞘内预注射KN-93可抑制CCI大鼠脊髓背角磷酸化CREB的表达,提示钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在脊髓水平介导神经病理性疼痛的作用与促进脊髓背角磷酸化CREB的释放有关。