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猪的抗病育种一直是养猪科研的重点研究内容,尤其是中外猪种的免疫力差异,从遗传的角度来研究中国猪种的抗病力对猪的抗病新品种培育非常重要。miR-155在免疫平衡和免疫系统中起着关键的作用,并广泛参与T细胞的活化、增殖和分化。本研究旨在利用凝胶电泳迁移实验探究猪miR155宿主基因Bic内含子的SNP与转录因子Foxp3的结合能力差异,在个体水平利用流式细胞仪分选了两种单倍型的Treg细胞并提取总RNA进行转录组测序,对两种单倍型个体的表达谱芯片进行了功能聚类,还检测了Poly I:C刺激情况下对miR155表达的影响及转录因子Foxp3的调控作用。具体结果如下:(1)根据宿主基因Bic内含子区域的Pre-miR155上游305bp和168bp这两处发生A/C突变的SNP位点,利用PCR-RFLP技术在培育品种-湖北白猪中酶切鉴定了两种单倍型AA和CC个体。(2)利用流式细胞仪通过标记CD3+CD4+CD25+三阳分选了AA和CC两种单倍型的调节性T细胞(Treg),并利用微量RNA提取试剂盒抽提了Treg细胞的总RNA,将RNA进行转录组测序,数据分析得到与免疫系统相关的基因有126个,在CC单倍型Treg细胞内上调表达的基因有122个,而下调表达的基因有4个;通过差异基因聚类分析发现与免疫应答相关的基因有23个;找到10个miR155的靶基因,其中3个靶基因有显著差异,另外7个没有显著差异,SOCS1以及SLA-6在CC单倍型Treg细胞内表达量较高,而MYLK在CC单倍型Treg细胞内不表达。测序所得的核糖体RNA比例较高,有效数据量不大。(3)在杜洛克x二花脸F2代群体酶切分型鉴定了两种单倍型的个体,利用Affymetrix表达谱芯片数据进行了AA单倍型和CC单倍型之间的差异基因筛选,通过对33d和35d的杜二F2群体表达谱芯片数据分析我们分别共检测到554个和232个两种单倍型之间差异表达的探针(p<0.05),然后将差异表达基因进行功能聚类,筛选到与miR-155功能调控相关的基因包括ETS2、ATF3、TGFβ-1、TGFB1、IL15、SLA-DRB1、SOCS1和CASP8。(4)利用凝胶电泳迁移实验技术探讨猪的Foxp3蛋白与Bic基因中A/C型片段的结合能力差异,结果发现Foxp3与AA型片段的结合能力较CC型要强。(5)在巨噬细胞上验证Poly I:C刺激情况下miR155的表达变化及转录因子Foxp3对miR155的表达调控,结果表明miR155-5p的表达量在刺激12h内有所上调,但差异不显著;且Poly I:C刺激之后,Foxp3超表达发现miR155-5p的表达量显著上调。上述研究结果表明位于宿主基因Bic内含子区域的SNP突变是功能突变,能够影响转录因子Foxp3的结合能力,为揭示我国地方猪种与国外猪种的免疫力差异提供了理论依据,为抗病育种提供了分子标记。