积雪草(Centella asiatica (L.) Urban)作为一种传统药材,其应用历史已达数千年之久,现代医学研究表明积雪草可用于烧伤、抑郁症、胃溃疡等相关疾病的治疗。积雪草中主要的药效物质是一类由五环三萜皂苷组成的皂苷类物质,统称为积雪草总苷,包括现已被广泛研究的积雪草苷、羟基积雪草苷、多米诺积雪草苷等一系列五环三萜皂苷同系物。其中积雪草苷已在医药和化妆品领域获得广泛应用,常被用于治疗疤痕、抗抑郁、促进表皮生长。这些五环三萜皂苷类同系物结构复杂相似,彼此间在羟基、甲基、双键组成上仅存在数量或位置上的细微差异,其中还包含多对同分异构体。它们结构差异细微的同时往往还带有相同结构的糖链,在此糖链的影响下这些差异变得更加微小,以致分离工作存在相当大的难度,造成工业生产过程中效率低、能耗大、产品价格高等缺点。因此,研究积雪草中五环三萜皂苷类同系物的分离纯化有利于更好地利用积雪草资源,并能为其它来源的五环三萜皂苷类物质的分离工作提供参考依据。针对以上情况,本文系统介绍了积雪草中的活性成分研究现状,并综述了积雪草中活性物质的利用概况及其分离纯化方法的研究进展。为揭示五环三萜皂苷类物质的分离规律,并开发一种绿色高效分离制备积雪草苷的方法,本课题以积雪草中五环三萜皂苷类同系物为研究对象,首先对其中五环三萜皂苷类物质的组成进行了研究,接着用传统的色谱分离手段对这些五环三萜皂苷类同系物特别是其中多对同分异构体的分离规律进行了研究,最后通过其中两种主要成分积雪草苷、羟基积雪草苷结晶热力学性质差异的探索与机理分析,建立了一种从积雪草总苷出发采用溶剂结晶法高纯度积雪草苷的新工艺方法,用以替代现行工业生产中的色谱分离方法。主要内容如下：1.积雪草中五环三萜皂苷类物质的制备采用制备色谱仪,从积雪草总苷出发,在不同流动相、色谱柱条件下,制备得到12种单体,并通过四大波谱技术鉴定单体结构。除得到三种常见的成分积雪草苷、羟基积雪草苷、多米诺积雪草苷外还发现了四种已知化合物centellasaponin A、centellasaponin B、scheffoleoside A、 2α,3β,23-trihydroxyurs-20-en-28-oic-acid-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-Oβ-D-glucopyr anosyl ester,另还有五种未见有相似碳谱数据报道的化合物,它们可能为从积雪草中发现的新化合物。2.色谱法分离积雪草中五环三萜皂苷类同系物的规律研究制备得到12种五环三萜皂苷单体,其中有许多同分异构体,研究了其中多对同分异构体羟基积雪草苷与多米诺积雪草苷、积雪草苷与centellasaponin A等的色谱分离方法,归纳总结了这些五环三萜皂苷类物质的色谱分离规律。并在此基础上建立了积雪草苷的HPLC精确定量分析方法,解决了分析过程中积雪草苷容易被其它结构相似的同系物或是同分异构体干扰的问题。3.积雪草苷与羟基积雪草苷结晶过程热力学差异研究采用静态平衡法测定了积雪草苷和羟基积雪草苷于不同混合溶剂中不同温度下的溶解度,采用激光法测定了积雪草苷和羟基积雪草苷于不同混合溶剂中的诱导期,并回归得到积雪草苷于不同甲醇-水混合溶剂中的界面能,介于0.55～0.86mJ/m2范围之间。4.结晶分离制备积雪草苷的工艺研究分析并探讨了积雪草苷与羟基积雪草苷在结晶热力学性质方面的差异与其分子结构特点、分子构象变化之间的联系,在此基础上成功开发了使用溶剂结晶法分离制备积雪草苷的工艺方法。