研究背景:视网膜变性是一类难治性疾病,其中较常见的包括年龄相关性黄斑变性（age related degeneration,AMD）、视网膜色素变性（retinitis pigmentosa,RP）等。氧化应激,炎症,代谢失调,遗传因素等造成视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelium,RPE）的功能障碍继而导致视网膜感光细胞和脉络膜的变性和萎缩,是这些视网膜变性类疾病的发生的原因。因视网膜属于终末神经组织,神经细胞再生困难,此类疾病的治疗非常棘手。细胞移植是治疗RPE细胞变性的具有前景的方法。目前研究较多的用于视网膜变性疾病治疗的细胞中,胚胎干细胞（embryonic stem cells,ESCs）因其全能分化特性（可分化为包括RPE在内的体内所有细胞类型）和无限增殖能力,被认为是可用于视网膜变性类疾病治疗的重要种子细胞。然而,ESCs来源的治疗细胞的免疫排斥和成瘤风险、以及不可控增殖、伦理学等问题限制了 ESCs的临床使用。iPSCs具有与ESCs类似的形态和分化能力,来源广泛,无免疫排斥且不存在伦理问题,但细胞制备成本过高,程序复杂,分化效率还不高,原细胞的基因缺陷仍然存在,诱导中的基因突变问题尚未解决,用于人体的临床实验已暂时中止。与ESCs和iPSCs相比,胎儿RPE具有分离培养相对简单,在体外具有较强的增殖能力,免疫原性低等特点,在治疗中枢神经系统疾病的细胞移植中,胎儿细胞已被证明效果良好,但在视网膜变性里研究较少。动物实验对任何疾病研究与治疗都是极其重要的。尽管视网膜变性的鼠模型能够用于基本的生理及视觉相关基因研究,但鼠没有黄斑结构,与人种属差异较大,而非理想的视网膜变性动物模型。灵长类动物具有与人相似的黄斑结构,但一直没有一种合适的视网膜变性的动物模型,制约了该类疾病的研究。本研究首次实验通过颈动脉注射碘酸钠制作食蟹猴视网膜变性的动物模型,并通过视网膜下移植胎儿来源的RPE细胞对其进行治疗,观察其存活情况及可能的疗效。方法:1.选用8只健康雄性食蟹猴,随机分为l0mg/kg、15mg/kg、20mg/kg、25mg/kg四组,每组各两只。按分组,通过单侧颈动脉注射根据体重计算出的相应剂量碘酸钠造模,对侧眼为对照。通过ERG,眼底照相,FFA,OCT观察造模后的视网膜结构和功能的变化,筛选出合适的造模剂量。2.自流产胎儿眼球获取原代视网膜色素上皮细胞,分离,培养,观察细胞形态,通过流式细胞仪和免疫荧光染色对其进行鉴定;通过内路法在显微镜直视下将人胎儿视网膜色素上皮细胞移植到视网膜变性食蟹猴模型的神经视网膜下,通过ERG,眼底照相,FFA,OCT观察造模后的视网膜结构和功能的变化,通过组织切片观察色素上皮的存活状况。结果:1.各剂量组食蟹猴造模后1周起眼底照片和FFA显示视网膜色素上皮发生萎缩,脱色素改变,逐渐加重,6周后各组可看到不同程度的色素上皮萎缩,呈剂量依赖性,其中20mg/kg组及眼底彩照,OCT及FFA显示极部色素斑驳,上皮萎缩明显。各剂量组视网膜电图a,b波在造模后首次检查时下降到最低,在造模后6周内都缓慢回升,l0mg/kg组和15mg/kg组恢复近造模前水平。20mg/kg组缓慢上升后维持在较低水平。25mg/kg组ERG明显下降,不能量化检查。2.胎儿RPE细胞分离后能在体外培养并能监测到分子标志物ZO-1、RPE65的表达。移植后立即进行OCT检查可以见到视网膜的泡样隆起,术后四周起在眼底照片上可见团块状色素增殖改变,OCT示色素带局部粗糙增厚,ERG a,b波有少许上升,但与对照相比差异没有显著性。组织切片检查可见增殖的色素细胞。结论:1.颈动脉注射20mg/kg碘酸钠,可以造成食蟹猴视网膜色素上皮萎缩和视网膜功能减退,是一个安全,可控的视网膜变性动物模型的制作方法。2.显微镜直视下免玻切内路法视网膜色素上皮细胞移植是一种简单,成功率高的细胞移植方法。3.胎儿RPE细胞能在食蟹猴神经视网膜下存活,未见明显的排斥反应,但未观察到视网膜功能的明显改善。