致病性大肠杆菌(EPEC)是一类重要的食物源性病原菌。对EPEC感染主要用抗生素进行治疗,但抗生素治疗会带来一些副作用。目前还没有疫苗来预防EPEC的感染。菌壳是一种无胞质内容物的空壳状的无活性的细菌结构,完好地保留了细菌菌体和各种抗原结构,是一种具有良好应用前景的灭活疫苗。为了制备致病性大肠杆菌菌壳,首先从PhiX174噬菌体扩增裂解E基因,克隆到温敏质粒pBV220,并转化到大肠杆菌DH5α,构建了重组质粒pBV220::E,该质粒对DH5α的裂解效率为99.76%。为实现E基因和葡萄球菌核酸酶A基因的双温控调节表达,扩增温控调节片段和葡萄球菌核酸酶A基因融合片段CI-P-SNA,并克隆到质粒pBV220::E,重组质粒pBV220::E::CI-P-SNA对菌株DH5α的裂解效率为99.53%。然后分别将重组质粒pBV220::E和pBV220::E::CI-P-SNA电转化到EPEC E2348/69 (O127:H6),转化后的重组菌株分别命名为F158和F159。对F158和F159细菌制备菌壳的生物学和免疫学特性进行研究,结果表明重组质粒对F158和F159均有很高的裂解率,裂解率分别为99.92%和99.95%。EPEC菌壳经5%或10%的NaCl溶液冻融处理后,可将其中残存的活菌完全灭活。经42℃升温诱导裂解制备的EPEC菌壳保持有细菌的基本形态,具有完整的细菌外膜结构,由于细胞内容物外流,细菌形态变圆,表面发生明显皱缩。利用小鼠感染模型进行的实验显示F158菌壳和F159菌壳对小鼠具有良好的安全性,F158菌壳免疫保护率为13/20,F159菌壳免疫保护率为16/20。本研究结果表明EPEC菌壳具有良好的安全性和免疫保护效果,可作为预防EPEC感染的候选疫苗,为最终研究出致病性大肠杆菌疫苗奠定了基础。