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目的: 本室前期应用比较蛋白质组学,从DADS处理的SW480细胞系中,筛出了一些具有潜在应用价值的差异蛋白质分子。本实验就部分差异表达蛋白质进行进一步分析与鉴定,因此,我们选择泛肽、CK19和FKBP蛋白质进行验证,为下一步的实验研究奠定坚实的基础。 方法: 采用MTT实验、细胞计数法,观察不同浓度和作用时间DADS对SW480细胞的生长抑制作用;施用流式细胞仪,分析50μg/ml DADS对SW480细胞的周期分布及凋亡率的影响;运用RT-PCR方法,检测CK19 mRNA表达水平;用免疫印迹方法,分析50μg/ml DADS处理SW480细胞系后泛肽、CK19和FKBP的表达水平。 结果: MTT比色法检测显示,DADS能明显抑制SW480细胞系生长增殖,呈浓度和时间依赖性,SW480细胞系经25μg/ml,35μg/ml,50μg/ml和70μg/ml DADS处理48h,其细胞生长增殖抑制率分别为18.67％、33.02%、49.12%和66.86%,细胞生长增殖速度明显较对照组慢,差异有显著性意义(P<0.05)。细胞计数结果表明, SW480细胞群体倍增时间为30.81h,而当DADS的浓度由25μg/ml增加到70μg/ml时,其细胞群体倍增时间由34.68h延长至96.33h,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。流式细胞仪分析结果显示,50μg/ml DADS将SW480细胞阻滞在G2/M期,并使细胞凋亡率增加。应用半定量RT-PCR检测CK19的基因mRNA表达水平,结果证实,50μg/ml DADS处理SW480细胞后,CK19 mRNA表达较对照组降低,差异有显著性意义(P<0.05);Western blotting分析结果显示,50μg/ml DADS处理SW480细胞48h,泛肽表达较对照组增强,而CK19和FKBP的表达明显降低,差异均为2倍以上。 结论: 1.DADS能抑制SW480细胞系的生长增殖,且呈剂量依赖效应。 2.DADS抑制SW480细胞系生长增殖,可能与泛肽表达上调,CK19和FKBP表达下调,将细胞阻滞在G2/M期及促进细胞凋亡有关。