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新疆是全国最大的薰衣草种植基地,已拥有五十年的栽培历史,积累了丰富的种质资源。薰衣草现已广泛应用于医药、食品和日用化工等方面。薰衣草遗传多样性的研究对开展薰衣草种质资源的收集、保存、分类和鉴定工作具有重要的意义。本研究对65份薰衣草种质资源进行了表型性状的田间调查和遗传多样性分析,通过ISSR-PCR及SRAP-PCR反应体系的优化、ISSR及SRAP分子标记引物的筛选和遗传多样性分析的研究,为薰衣草种质资源的鉴定、分类、保存工作提供了理论依据,为薰衣草育种工作提供了科学依据。主要研究结果如下:
1.调查了65份薰衣草种质资源的表型性状,同时利用主成分分析和聚类分析方法对其遗传多样性进行综合评价。结果显示:65份薰衣草各种质资源表型性状变异较丰富,变异系数为5.98-38.64%;主成分分析结果表明,前3个主成分代表了65份薰衣草种质资源的表型性状63.893%的信息。其中,贡献率分别为38.657%、14.608%、10.628%。聚类分析结果说明,在遗传距离为4.0和12.0时,可将薰衣草属65个品系为3大类9小类,其中第1大类包括第1、2、3、4小类,第2大类包括第5小类,第3大类包括第6、7、8、9小类。
2.建立了薰衣草SRAP-PCR反应体系。在25μL体系中Mg2+浓度3.0mmol/L、dNTPs浓度0.32mmol/L、引物浓度0.24umol/L、DNA模板量60ng、TapDNA聚合酶用量0.4U;从153对SRAP引物里筛选出11对核心引物,共获得192个扩增位点,其中多态性位点182个,多态性百分比为94.79%;每条核心引物扩增出的多态性位点12-22个,平均值16.54个。利用POPGENE1.32软件对65份薰衣草品系进行遗传相似性和遗传距离,遗传相似范围在0.5104-0.8854,平均为0.2002,遗传距离的变化范围为0.1217-0.6931,平均为0.3373;遗传多样性参数的等位基因数(Na)为1.9635,有效等位基因数(Ne)为1.5556,Neis基因多样性指数(He)为0.3203,Shannon信息指数(I)为0.4793。聚类分析和主成分分析结果一致、把供试的试验材料可分为4个类群。第Ⅰ类群包括35份,第Ⅱ类群包括1份,Ⅲ类群包括1份和Ⅳ类群包括28份种质。
3.建立了薰衣草ISSR-PCR反应体系。在25.0μL体系中2.5μL10×Buffer、Mg2+浓度1.5mmol/L、dNTPs浓度0.45mmol/L、引物浓度0.7μmol/L、DNA模板量100ng、TapDNA聚合酶用量0.1U;从100条ISSR引物里筛选出15条核心引物,共获得205个扩增位点,其中多态性位点168个、多态性百分比为81.95%;每条核心引物扩增出的位点为8-19个,平均为16.66个;每条核心引物的多态性位点为4-17个,平均值为11.20个。利用POPGENE1.32软件进行遗传相似性和遗传距离分析表明,遗传相似系数为0.6244-0.9317,平均值为0.3712,遗传距离的变化范围为0.0707-0.5108,平均为0.1509;等位基因数(Na)为1.8488,有效等位基因数(Ne)为1.4362,Neis基因多样性指数(He)为0.2536,Shannon信息指数(I)为0.3846。聚类分析及主成分分析结果一致,把材料可分为2个大类群。第Ⅰ类群包括36份、第Ⅱ类群包括29份种质。
4.由ISSR和SRAP计算得到的两组相似系数之间的相关系数r=0.8329,达到极显著水平,表明ISSR标记和SRAP标记这两种技术对薰衣草遗传多样性的分析具有较高的一致性和可信度。
1.调查了65份薰衣草种质资源的表型性状,同时利用主成分分析和聚类分析方法对其遗传多样性进行综合评价。结果显示:65份薰衣草各种质资源表型性状变异较丰富,变异系数为5.98-38.64%;主成分分析结果表明,前3个主成分代表了65份薰衣草种质资源的表型性状63.893%的信息。其中,贡献率分别为38.657%、14.608%、10.628%。聚类分析结果说明,在遗传距离为4.0和12.0时,可将薰衣草属65个品系为3大类9小类,其中第1大类包括第1、2、3、4小类,第2大类包括第5小类,第3大类包括第6、7、8、9小类。
2.建立了薰衣草SRAP-PCR反应体系。在25μL体系中Mg2+浓度3.0mmol/L、dNTPs浓度0.32mmol/L、引物浓度0.24umol/L、DNA模板量60ng、TapDNA聚合酶用量0.4U;从153对SRAP引物里筛选出11对核心引物,共获得192个扩增位点,其中多态性位点182个,多态性百分比为94.79%;每条核心引物扩增出的多态性位点12-22个,平均值16.54个。利用POPGENE1.32软件对65份薰衣草品系进行遗传相似性和遗传距离,遗传相似范围在0.5104-0.8854,平均为0.2002,遗传距离的变化范围为0.1217-0.6931,平均为0.3373;遗传多样性参数的等位基因数(Na)为1.9635,有效等位基因数(Ne)为1.5556,Neis基因多样性指数(He)为0.3203,Shannon信息指数(I)为0.4793。聚类分析和主成分分析结果一致、把供试的试验材料可分为4个类群。第Ⅰ类群包括35份,第Ⅱ类群包括1份,Ⅲ类群包括1份和Ⅳ类群包括28份种质。
3.建立了薰衣草ISSR-PCR反应体系。在25.0μL体系中2.5μL10×Buffer、Mg2+浓度1.5mmol/L、dNTPs浓度0.45mmol/L、引物浓度0.7μmol/L、DNA模板量100ng、TapDNA聚合酶用量0.1U;从100条ISSR引物里筛选出15条核心引物,共获得205个扩增位点,其中多态性位点168个、多态性百分比为81.95%;每条核心引物扩增出的位点为8-19个,平均为16.66个;每条核心引物的多态性位点为4-17个,平均值为11.20个。利用POPGENE1.32软件进行遗传相似性和遗传距离分析表明,遗传相似系数为0.6244-0.9317,平均值为0.3712,遗传距离的变化范围为0.0707-0.5108,平均为0.1509;等位基因数(Na)为1.8488,有效等位基因数(Ne)为1.4362,Neis基因多样性指数(He)为0.2536,Shannon信息指数(I)为0.3846。聚类分析及主成分分析结果一致,把材料可分为2个大类群。第Ⅰ类群包括36份、第Ⅱ类群包括29份种质。
4.由ISSR和SRAP计算得到的两组相似系数之间的相关系数r=0.8329,达到极显著水平,表明ISSR标记和SRAP标记这两种技术对薰衣草遗传多样性的分析具有较高的一致性和可信度。