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目的:验证黄厚止泻滴丸能否治疗湿热型溃疡性结肠炎模型小鼠以及可能的药效机制。方法:首先应用网络药理学进行预测,用TCMSP数据库和分析平台(http://tcmspw.com/tcmsp.php)对黄厚止泻滴丸各单味药的活性成分和靶点进行预测分析,在GeneCard s数据库(https://www.genecards.org/)中获取溃疡性结肠炎相关靶点基因,应用Cytoscap e3.6.0软件的“Network Analyzer”功能进行药物-化合物-靶点-疾病网络的构建与分析,利用STRING数据库(https://string-db.org/)进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络的构建并选择关键靶标,R软件中安装GO和KKEGG富集分析R包后进行GO功能富集和K EGG通路富集分析,筛选出黄厚止泻滴丸治疗溃疡性结肠炎的主要信号通路。然后进行动物实验,将Balb/c小鼠分组后参照《中医药动物实验方法学》和葡聚糖硫酸钠(DS S)诱发的小鼠溃疡性结肠炎的相关文献,首先应用高糖高脂饲料将Balb/c小鼠造成大肠湿热型模型,然后应用DSS自由饮将小鼠造成大肠湿热型溃疡性结肠炎模型,成模后应用黄厚止泻滴丸进行治疗,在实验过程种对比各组小鼠疾病活动指数(DAI)、结肠黏膜损伤指数(CDMI)、病理组织评分等,来评估黄厚止泻滴丸的治疗效果。应用酶联免疫吸附检测技术(Elisa法)对小鼠血清及结肠组织进行检测,对比分析IL-1β、TGF-β、IL-4、TNF-α、IL-6和IL-10各因子在各组中450nm波长的吸光度。取出小鼠脾脏后用滤纸吸干残血后,称重,应用公式:脾脏指数=脾脏重量/体重×100%对脾脏指数进行计算,对各组的脾脏指数进行对比。应用Western Blot检测结肠组织中MAPK/NF-κB信号通路的相关因子COX2、P65、iNOS、P-MAPK、MAPK、P-P65蛋白的表达以及结肠组织中紧密连接蛋白claudin-1,ZO-1,occludin的表达。应用16sRNA对空白组、模型组、黄厚中剂量组(治疗组)三组小鼠的粪便进行检测并进行对比分析,评估黄厚止泻滴丸对大肠湿热型溃疡性结肠炎肠道菌群的影响。结果:应用网络药理学对黄厚止泻滴丸进行检索,经过检索可见干姜有5种有效成分;厚朴有2种有效成分;黄连有14种有效成分;木香有6种有效成分,这些有效成分共有147个靶基因,溃疡性结肠炎共有4622个相关基因,与黄厚止泻滴丸共有62个共同基因。有效成分—作用靶点—疾病相互作用网络结果可见黄厚止泻滴丸中能与上述靶基因作用的有效成分,共20个。STRING数据库可以得到互作关系排名前30位关键靶基因,共影响了 79个生物过程,主要通过影响结合(blinding)、受体激活(receptor act ivity)等生物过程来治疗溃疡性结肠炎。可以影响70条信号通路,PI3K-AKT信号通路、AGE-RAGE信号通路、MAPK信号通路为关键通路。小鼠实验可见模型组的DAI得分和CDMI得分均高于空白组。病理方面,模型组肠黏膜正常结构消失,组织内杯状细胞数量大量减少,大量炎性细胞增生,从而证明溃疡性结肠炎模型建模成功。将小鼠分组后,分别用黄厚止泻滴丸和美沙拉嗪处理模型小鼠。结果对比分析表明,黄厚止泻滴丸可以明显改善溃疡性结肠炎模型小鼠的体重减轻、腹泻、便血和结肠损伤。且黄厚中剂量组显示出与美沙拉嗪相似的治疗效果。测定血清及结肠组织中的炎症因子可见模型组IL-1β、TNF-α、IL-6、TGF-β炎症相关因子显著高于对照组(P<0.05)。经黄厚止泻滴丸治疗后上述因子的含量明显低于模型组(P<0.05)。进一步比较黄厚止泻滴丸各组发现黄厚中剂量组效果最好(P<0.05),与阳性对照组美沙拉嗪相似(P>0.05)。模型组IL-4、IL-10含量显着降低(P<0.05),经黄厚止泻滴丸治疗后上述因子的含量明显高于模型组(P<0.05)。同样,黄厚止泻滴丸各组比较,黄厚中剂量组效果最好(均P<0.05)。脾脏指数评分可见空白组评分显著低于模型组,有明显统计学差异(P<0.05),经黄厚止泻滴丸治疗后,脾脏指数降低,但黄厚中剂量组与模型组的差异有明显统计学意义(P<0.05)。对MAPK/NF-κB信号通路的相关因子测定可见模型组与空白组相比,COX2、iNOS、表达水平显著升高(P<0.05);与模型组相比黄厚止泻滴丸可显著降低COX2和iNOS的表达(P<0.05)。对比P65、MAPK、P-MAPK、P-P65可见黄厚止泻滴丸可抑制P65、MAPK的磷酸化水平(P<0.05)。对于紧密连接蛋白的测定可见模型组与空白组相比,紧密连接蛋白claudin-1,ZO-1,occludin的表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01),黄厚止泻滴丸组与模型组相比可见黄厚止泻滴丸可明显提高claudin-1,ZO-1,occludin的表达(P<0.05)。肠道菌群分析可见α多样性分析显示模型组肠道菌群的丰富度和多样性显著低于空白对照组,物种差异分析显示三组菌群组成有较大差别,进一步分析可知模型组小鼠肠道中的拟杆菌门(Bacteroidetes)减少,而变形菌门(Proteobacteria)增加。β多样性分析发现空白组,模型组及治疗组三组样本不存在交叠现象,说明三组样本之间存在差异OUT的含量较高。从物种组成热图、LefSe分析及随机森林分析同样可见三组中的物种差异较大,由ZIPI图可知三组菌群中存在丰度最高的前5种关键物种,分别为厚壁菌门(Firmicutes),拟杆菌门(Bacteroidetes),变形菌门(Proteobacteria),软壁菌门(Tenericutes),疣微菌门(Verrucomicrobia),这些关键物种的变化足以影响整个菌群的变化。功能潜能预测可知核心菌群主要影响氨基酸的合成、核苷酸的合成及因子、修复基团、电子载体和维生素生物的合成,碳水化合物降解、羧酸盐降解、核苷和核苷酸降解,细菌耐药性,发酵作用,糖酵解作用,聚糖生物合成、聚糖降解、核酸形成,L-谷氨酸和L-谷氨酰胺生物合成、O-抗原结构单元生物合成(大肠杆菌)-磷脂酶,tRNA装载等生物过程。结论:网络药理学结果表明提示黄厚止泻滴丸与其他中药复方一样是通过多靶点、多途径、多通路来治疗溃疡性结肠炎的。在实验研究中对黄厚止泻滴丸治疗溃疡性结肠炎的分子机制进行探索,首先应用DSS建立小鼠溃疡性结肠炎模型,通过对比DAI评分、CDMI评分、HS评分可以看出黄厚止泻滴丸对溃疡性结肠炎的治疗效果良好。进一步研究发现其作用机制与调节细胞因子IL-1β、TGF-β、IL-4、TNF-α、IL-6和IL-10的表达,降低小鼠脾脏指数,保护紧密连接蛋白claudin-1,ZO-1,occludin从而修复肠粘膜屏障有关,且主要通过MAPK/NF-κB信号通路起作用。通过粪便菌群对比分析可知黄厚止泻滴丸可以促进益生菌和共生菌群的生长,抑制机会性致病菌或有害菌的定植,有助于维持肠道菌群的稳态,还可以通过影响核心菌群的数量来影响合成、降解等生物过程来治疗溃疡性结肠炎。