小黑杨PsnHomeobox13与PsnHomeobox15基因的功能分析

来源 :东北林业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:wcf2009
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克隆小黑杨HD-ZIP家族基因PsnHB13与PsnHB15,小黑杨PsnHB13基因cDNA全长870 bp,编码289个氨基酸,小黑杨PsnHB15基因cDNA全长2559 bp,编码852个氨基酸。两基因均为PsnCycD1;1转基因小黑杨转录组差异基因,表达量差异分析表明,两基因均随着PsnCycD1;1基因表达量升高而升高。组织特异性分析表明,PsnHB13基因和PsnHB15基因在小黑杨茎部的表达量相对其他部位最高。对PsnHB13、PsnHB15与PsnCycD1;1进行酵母双杂交互作验证结果表明,PsnHB13与PsnHB15存在相互作用,PsnHB13与PsnCycD1;1存在相互作用,PsnHB15与PsnCycD1;1之间不存在相互作用。构建植物过表达载体pROK Ⅱ-PsnHB13与pROK Ⅱ-PsnHB15,通过农杆菌介导的叶盘法将外源基因转入野生型烟草。通过观察转基因烟草的生长,发现过表达PsnHB13基因的转基因烟草与野生型相比出现叶面积变小、叶型变长,根系生长缓慢,花朵变小等明显特征,推测PsnHB13基因主要对烟草叶片、根系及花的生长发育起到负调控作用。过表达PsnHB15基因的转基因烟草与野生型相比出现叶片边缘凹凸甚至卷曲的表型,说明PsnHB15基因可能影响烟草植株叶片的生长发育从而改变叶形。遗传转化小黑杨后,PsnHB13与PsnHB15转基因小黑杨株系在幼苗初期叶片长宽比明显增加,随着转基因株系的生长差异均逐渐减小直至无明显差异,证明两基因很可能影响小黑杨早期叶片的生长发育从而改变叶形。PsnHB13转基因小黑杨叶片和茎部干重与鲜重比值显著增加。表明该基因对小黑杨叶片与茎部的干物质积累有明显促进作用。同时PsnHB13转基因小黑杨植株明显变矮,表明该基因还抑制小黑杨茎部的生长发育。构建植物抑制表达载体pRNAi-PsnHB13和pRNAi-PsnHB15通过农杆菌介导法转化小黑杨,分别获得4个转基因小黑杨株系,在pRNAi-PsnHB13转基因小黑杨株系中PsnHB13基因表达量最低为野生型的1.16%。pRNAi-PsnHB15转基因小黑杨株系中PsnHB15基因表达量最低为野生型的1.11%。
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