渗透逆境胁迫诱导构巢曲霉RAM缺陷菌株极性生长恢复的分子调控机制研究

来源 :南京师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenliu2009
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细胞极性(CellPolarity)是指由于细胞内不同的膜组分以及不同的细胞骨架结构分布在细胞的不同部位导致细胞行使功能或生长的不均等或方向性。由于丝状真菌构巢曲霉具有许多独特的优势,因此可以作为研究细胞极性生长很好的模式生物。   已有的研究表明,MobB和CotA是形态建成调节网RAM(RegulatesbothAce2pactivityandcellularMorphogenesis)信号通路中调节极性生长的两个蛋白。我们实验室的前期研究发现CotA与MobB缺陷菌株在A.nidulans中的表型相似,即菌丝极性生长缺失并且完全丧失了产分生孢予的能力。渗透逆境胁迫可以使MobB和CotA缺失菌株菌丝极性生长恢复;但是,钙通道的抑制剂或钙离子螯合剂能够抑制这种极性生长恢复。提示CotA与MobB缺失菌株的逆境极性恢复这一现象受钙信号系统调控。本文在此基础上,采用荧光蛋白标记技术和真菌有性杂交、qRealtimePCR等方法研究了钙信号系统相关基因在RAM缺失菌株逆境恢复过程中的作用及应答。结果表明:(1)发现RAM和钙调磷酸酶CnaA双缺陷菌株以及RAM和钙离子通道蛋白MidA双缺陷菌株在逆境条件下都不能恢复极性生长;(2)RAM和钙调磷酸酶CnaA双缺陷菌株对胞钙离子超敏感,3mM的钙离子可以引起菌丝内胞质喷出,最终致死细胞;(3)钙离子通道蛋白CchA和RAM的双缺陷菌株则在逆境条件下可以恢复极性生长;(4)定量PCR分析表明RAM缺陷菌株在逆境条件下,钙信号通路相关基因cnaA,crzA,pmrA以及钙离子通道蛋白midA的mRNA表达量都有显著升高。   这些结果建议RAM缺陷菌株逆境恢复受Ca2+-MidA-Calcineurin钙信号通路中的重要元件所调控,RAM途径与钙信号通路在调控细胞极性生长过程中是平行互补的关系。然而,质膜钙离子通道CchA对于RAM缺失菌株逆境恢复影响不明显。   本论文首次报道了钙信号系统在RAM缺失菌株逆境恢复过程中的作用,对于掌握与真菌侵染性密切相关的极性生长的分子机理以及分析真菌适应周围环境变化的应答基础具有十分重要意义。  
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