猪圆环病毒Ⅰ型、Ⅱ型全基因克隆及其基因交换重组的研究

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:vincechuang
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
研究中参照猪圆环病毒(Porcine circovirus, PCV)的基因组特点,自行分离鉴定PCV1-YA1和PCV2-SC株两个四川分离株,分别克隆其全基因;采用酶切、连接技术实现了两个毒株间部分基因交换,即将PCV2的ORF1克隆到PCV1上,构建重组病毒疫苗株PCV1-2;将PCV1的ORF1克隆到PCV2上构建重组病毒疫苗株PCV2-1。并采用单酶切消化、外切酶部分降解等操作构建了PCV2部分基因组的真核表达质粒pEGFP-C1-PCV2-SC-A。研究目的在于以期望能筛选研究猪圆环病毒新型基因工程疫苗,同时也为开展PCV病毒功能基因组学研究奠定基础。 1.猪圆环病毒Ⅰ型YA1株的全基因克隆及生物信息学分析 试验中采用1对特异性引物(P1/P2),1次性扩增获得了1759bp的猪圆环病毒Ⅰ型(PCV1-YA1株)全基因组,将其克隆于pMD18-T质粒,构建了重组质粒pMD18-T-PCV1-YA1并进行了核苷酸序列测定及氨基酸序列推导。PCV1-YA1株与Genbank中公布的其它7个PCV1毒株间的同源性高达98.8-99.9%。氨基酸序列推导显示,PCV1-YA1株ORF1编码312个氨基酸,在20-22aa(NPS)有一个糖基化位点;ORF2编码233个氨基酸,在102-104aa(NYS)存在一个糖基化位点。疏水性和跨膜区分析结果表明PCV1-YA1株的ORF1集中在3个部分出现9个潜在疏水性区域和2个跨膜区;ORF2则存在2个潜在疏水性区域和1个跨膜区。 2.猪PCV2-SC株的分离鉴定及其全基因克隆与生物信息学分析 ELISA检测及荧光抗体检测确诊猪圆环病毒临床病例,分离了猪圆环病毒野毒(PCV2-SC)株。本试验中采用1对特异性引物(P3/P4),1次性扩增获得了1767bp的猪圆环病毒Ⅱ型PCV2-SC株全基因组,将其克隆于pMD18-T质粒,构建了重组质粒pMD18-T-PCV2-SC并进行了核苷酸序列测定及氨基酸序列推导。通过BLAST与GenBank中来自美洲、欧洲及中国的部分PCV2毒株进行同源性比较分析,结果PCV2-SC株与Genbank中公布的其它16个毒株间的同源性介于93.6-98.6%,而与PCV1-YA1株相比其同源性则仅为69.2%。并对其主要ORF与其它PCV2毒株进行了比较,结果PCV2-SC株的ORF1与16个毒株的ORF1之间同源性为94.7-99.4%;ORF2的同源性则为90.3-99.6%。利用测定的PCV2-SC株ORF1和ORF2核苷酸序列推导了其对应的氨基酸序列,其中ORF1
其他文献
目的探讨以HEOS宫腔镜技术在对宫腔粘连综合治疗中的应用价值及效果。方法52例宫腔粘连Ⅱ度、Ⅳ度患者随机分为A组(HEOS宫腔镜治疗组),B组(传统宫腔镜治疗组),每组26例,评估H
回 回 产卜爹仇贱回——回 日E回。”。回祖 一回“。回干 肉果幻中 N_。NH lP7-ewwe--一”$ MN。W;- __._——————》 砧叫]们羽 制作:陈恬’#陈川个美食 Back to yield
随着铁路牵引动力设备的发展,全路干线大量采用内、电机车牵引,其车体长、重,且走行部结构复杂,牵引电机及齿轮箱距轨面高度仅75mm。若仍用钢丝绳吊起勾头起吊,则极易损坏机
期刊
冷战的终结改变了世界的政治版图和国际政治的进程。苏联的解体,使美国脱颖而出成为当今世界惟一的超级大国。在短暂的疲惫期结束后,美国强行推动以美国模式为代表的资本主义经
肌电图(electromyography,EMG)是研究肌肉静息和随意收缩及周围神经受刺激时的各种电生理特性的技术。通常包括两个含义,即广义肌电图和狭义肌电图,前者包括神经传导速度、重复神
脂肪性状是优质鸡肉品质评价的重要指标,此类性状的发育会直接影响其商品性能。因此,有必要开展调控脂肪性状发育的基因的研究。Adipocyte differentiation-related protein(
综述了煤本身所固有的矿物质和外来添加物在煤热解、气化过程中的作用,主要针对煤中氮的形态变化和迁移规律进行了讨论。煤中的含氮物在热解气化过程中以 HCN、NH3N2等形式释
因为我国在运输方面的需求有所转变,公路与桥梁的工程质量要求也随之呈现了转变,混凝土强度是影响桥梁质量的核心问题,对桥梁的使用寿命与安全都至关重要。贯入法是一种检测
抚养费是离婚家庭中子女生活的物质保障,子女健康成长关系到整个社会的未来与稳定。我国有关抚养费的法律都制订了比较久远,不能满足现代的复杂社会。本文突出讨论我国抚养费