以右旋磷霉素为底物微生物转化法制备左旋磷霉素的初步研究

来源 :沈阳药科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yuxk781224
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磷霉素是一种小分子的广谱抗生素,对革兰阳性菌和革兰阴性菌均有杀灭作用,随着近年来药理研究的不断深入,其应用范围越来越广泛。由于磷霉素结构简单,目前工业生产仍使用早期发明的化学合成法,但该方法生产的总收率不足35%,且产物为外消旋体,其中有与左旋磷霉素等量的无活性的右旋磷霉素,无法加以利用。这不仅导致生产成本提高和资源浪费,也同时对环境造成了很大压力。因此,实现右旋磷霉素的再利用,是提高磷霉素产值、减少废物、废水排放的一条有效途径。本文以工业生产废弃物-右旋磷霉素复盐为底物,通过固体琼脂块初筛和液体摇瓶复筛对本实验室微生物菌种库中的2856株真菌进行了转化能力的筛选,并通过薄层色谱法与生物显影法相结合的鉴定方法,对转化液中的产物进行鉴定,最终获得15株有转化能力的真菌,其中10株为青霉,3株曲霉,1株灰葡萄孢,1株燕麦镰孢,并且菌株2221(经鉴定为沙门柏干酪青霉)转化量较高,确定为后续实验用菌株。本文对转化液产物进行了初步分离,将初步处理的pH7.5的转化液上活化后的717阴离子交换树脂柱,使用2%NH4Cl溶液洗脱,再经过手性拆分和纯化,并经毛细管电泳和质谱确定纯化产物为左旋磷霉素,测得其旋光度为-1.5°(20mg/mL).初步转化工艺研究结果确定种子培养基为1%葡萄糖的PDA液体培养基,转化培养基为含0.3%底物和0.3%葡萄糖的PDA液体培养基,pH自然,分装60mL/250mL。并确定了较优的转化条件:种龄24h,转种量10%,转化温度25℃-28℃,摇床转速200 r/min,转化培养4d,生物转化率可达22.8%。
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