厚朴和厚朴花中挥发油与多糖的分离纯化、组分分析及生物活性的研究

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厚朴(Magnolia officinalis Rehd.et Wils.)是木兰科木兰属植物,厚朴花是厚朴的干燥花蕾。中药厚朴为木兰科植物厚朴的干皮、根皮或枝皮,本课题选择厚朴干皮(下文称厚朴)和厚朴花作为研究对象,进行了挥发油提取和成分分析、多糖提取、分离纯化和结构鉴定,研究了挥发油和多糖类物质的抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抑菌、降血糖和抗光老化等多种生物活性,主要结果如下:分别用同时蒸馏萃取法(SDE)和水蒸气蒸馏法(SD)提取厚朴和厚朴花挥发油,用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)对得到的四种挥发油样品进行成分分析。结果表明,两种提取方法提取得到的挥发油成分和种类存在较大差异。SD法厚朴挥发油中含有21种化合物,厚朴花挥发油含有25种化合物;SDE法厚朴挥发油含有27种化合物,厚朴花挥发油含有31种化合物。厚朴花挥发油主要成分之一是d-柠檬烯,厚朴挥发油主要成分是桉叶醇类和d-柠檬烯。四种挥发油进行抗氧化、抗肿瘤、抗炎活性的研究结果表明:挥发油样品的总还原力值、还原Fe3+的能力和清除羟自由基能力很低,有一定的清除DPPH自由基和ABTS+·的能力;对Hep G2人肝癌细胞、MDA-MB-231乳腺癌细胞和H1299肺癌细胞均有抑制作用,呈浓度依赖性。抗炎实验中利用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7小鼠巨噬细胞建立细胞炎症模型,发现四种挥发油均可抑制炎症因子一氧化氮(NO)、白介素(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的释放,深入研究发现,四种挥发油可以下调炎症介质i NOS、TNF-α、IL-6的m RNA表达。以多糖得率为指标优化了厚朴和厚朴花多糖的提取工艺,最佳工艺为:厚朴多糖提取温度91℃,液料比32.00m L/g,提取时间3.00h,得率为4.12%;厚朴花多糖提取温度94℃,液料比25.50m L/g,提取时间3.40h,得率为5.50%。热水浸提的多糖经脱色,醇沉,脱蛋白、冷冻干燥之后分别得到厚朴粗多糖(MO)和厚朴花粗多糖(MOF),厚朴粗多糖经DEAE-52层析柱分离得到MO-Ⅰ、MO-Ⅱ、MO-ⅡI、MO-ⅠV四个组分,厚朴花粗多糖得到了MOF-Ⅰ、MOF-ⅠI、MOF-ⅠII三种组分,其中经过GPC分析,MO-Ⅰ、MO-Ⅱ、MOF-Ⅰ多糖为组分相对单一的纯化多糖,重均分子量分别为5886Da,39195Da,6756Da,并对三种纯化多糖进行了理化性质分析。对MO-Ⅰ、MO-Ⅱ、MOF-Ⅰ进行结构分析,发现均主要由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成。核磁共振结果显示MO-Ⅰ和MO-Ⅱ均为酸性多糖,由5种单糖组成,含有α和β两种吡喃糖苷键结构;MOF-Ⅰ是酸性且含硫酸基团的多糖,由5种单糖组成,含有α和β两种吡喃糖苷键结构,主链主要以1→6型糖苷键连接。刚果红实验说明MO-Ⅰ、MO-Ⅱ不存在三螺旋空间构象,MOF-Ⅰ存在三螺旋空间构象。MO-Ⅰ、MO-Ⅱ和MOF-Ⅰ多糖的降血糖活性结果表明:三种多糖样品对α-葡萄糖苷酶具有一定的抑制效果,MO-Ⅰ为α-葡萄糖苷酶反竞争性抑制剂,MO-Ⅱ和MOF-Ⅰ为α-葡萄糖苷酶竞争性抑制剂;多糖样品组在一定浓度范围内均能促进胰岛素抵抗Hep G2细胞的葡萄糖消耗,浓度在800μg/m L时效果最显著。抗光老活性结果表明:MO-Ⅰ、MO-Ⅱ和MOF-Ⅰ多糖均能提高辐照后Ha Ca T人类永生化表皮细胞的增殖率,降低了光损伤细胞中炎症因子(NO、MMP-1、IL-6、TNF-α)的释放量,因而对辐照损伤细胞具有一定的保护作用。
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