【摘 要】
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猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRS virus,PRRSV）感染引起的一种高度接触性传染病,对全球养猪业造成了巨大的经济损失。波形蛋白（Vimentin）作为参与PRRSV感染的宿主细胞蛋白,在病毒入侵中发挥重要作用。近期研究显示,波形蛋白参与PRRSV复制,但是其在病毒复制
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（31972690）； 河南省自然科学基金优秀青年科学基金（202300410525）； 河南省农业科学院杰出青年科技基金（2021JQ01）； 河南省农业科学院优秀青年科技基金（2020YQ01）； 现代农业产业技术体系建
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猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRS virus,PRRSV）感染引起的一种高度接触性传染病,对全球养猪业造成了巨大的经济损失。波形蛋白（Vimentin）作为参与PRRSV感染的宿主细胞蛋白,在病毒入侵中发挥重要作用。近期研究显示,波形蛋白参与PRRSV复制,但是其在病毒复制过程中的具体作用机制尚未完全阐明。因此,本研究围绕波形蛋白在PRRSV复制中的作用机制开展了一系列试验:（1）PRRSV感染宿主细胞非洲绿猴胚胎肾细胞MARC-145和猪肺泡巨噬细胞（Porcine alveolar macrophages,PAMs）永生化细胞系CRL-2843-CD163后9 h,通过激光共聚焦显微术（Confocal laser scanning microscopy,CLSM）观察到波形蛋白纤维围绕以双链RNA（Double-stranded RNAs,ds RNAs）和非结构蛋白9（Non-structural protein 9,nsp9）为标志物的病毒复制中心（Replication compartment,RC）重构聚缩形成“笼状”结构,提示波形蛋白重构参与PRRSV复制。（2）利用亚氨基丙腈（3,3’-Iminodipropionitrile,IDPN）、丙烯酰胺破坏波形蛋白“笼状”结构后,通过CLSM发现原本在“笼状”结构中的ds RNAs分散于细胞质中,进一步通过荧光定量PCR（Quantitative real-time PCR,RT-q PCR）、病毒滴度试验揭示波形蛋白重构对病毒复制具有重要作用进而影响病毒感染。（3）通过免疫印迹法（Immunoblotting,IB）检测出PRRSV感染过程中波形蛋白蛋白水平没有变化而磷酸化水平升高,进一步利用特异性抑制剂KN-93证实钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（Calcium/calmodulin-dependent protein kinase II,Ca MKⅡ）磷酸化波形蛋白第38位丝氨酸、参与波形蛋白的重构进而影响病毒的复制。综上所述,本研究确定了PRRSV感染后波形蛋白发生重构,证明了波形蛋白重构对病毒复制具有重要作用,进一步鉴定诱导波形蛋白重构的机制。这些研究结果深入揭示了PRRSV复制机制,为防控PRRS提供了新的理论依据。
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