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鱼类养殖在我国水产养殖业中占有举足轻重的地位。病原微生物诸如病毒对青鱼养殖业构成了严重威胁,因此开展青鱼抗病毒相关研究在水产病害防控方面具有重要意义。本文主要研究RIG-I样模式识别受体(RLRs)天然免疫抗病毒信号通路中bcNAP1与bcMDA5的相互关系。NAK相关蛋白1(NAP1)参与人类和哺乳动物的NF-κB活化和IFN诱导;然而,硬骨鱼NAP1在先天免疫中的作用机制仍然未知。NAP1也称为AZI2和TBKBP2,首先被鉴定为IKK相关激酶的激活剂,并参与保护细胞免受TNF-α诱导的细胞凋亡。本文已经克隆并鉴定了青鱼的NAP1同源物(Mylopharyngodon piceus),进一步的对青鱼NAP1(bcNAP1)的功能也有做相关的研究。基因克隆的bcNAP1的cDNA有1068个核苷酸并编码355个氨基酸。ExPASy软件预测bcNAP1的分子量为40.44 KDa,理论等电点值为5.45。bcNAP1在免疫印迹法中迁移约47 k Da,并通过免疫荧光染色鉴定为胞浆蛋白。bcNAP1在双荧光素酶报告基因分析中几乎没有干扰素(IFN)启动子诱导能力,然而,当与青鱼MDA5(bcMDA5)共表达时,bcNAP1在双荧光素酶报告基因检测中明显增强了bcMDA5介导的IFN启动子诱导。而且,分别转染等量的Flag-bcNAP1和空载体,病毒滴度检测出bcNAP1没有显示出对鲤春病毒性血症病毒(spring viremia of carp virus即SVCV)的抗病毒能力。鱼类常见的病毒草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus即GCRV)感染也是相同的结果。而bcNAP1上调了bcMDA5对GCRV和SVCV的抗病毒活性。此外,bcNAP1和bc MDA5之间的关联已通过免疫荧光染色和免疫共沉淀(co-IP)分析进行了鉴定。因此,本研究的数据支持以下结论:bcNAP1与bcMDA5相互作用,并在宿主固有免疫激活过程中上调bcMDA5介导的抗病毒信号。最后,在青鱼的先天免疫防御的过程中,bcNAP1具有非常重要的作用并且我们的实验结果还表明bcNAP1激活bcMDA5介导的信号传导,是正调控的作用。