家蝇蛆粉替代鱼粉在凡纳滨对虾饲料中的应用

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本论文研究了凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)幼虾对家蝇蛆粉(housefly maggot meal)的表观消化率和饲料中不同比例家蝇蛆粉对凡纳滨对虾生长性能、抗氧化和免疫指标以及肌肉品质、消化酶活性、肝胰腺功能的影响。并运用分子生物学技术,研究了家蝇蛆粉替代鱼粉对凡纳滨对虾肝胰腺蛋白质代谢相关基因表达量的影响。具体研究内容和结果如下:1.凡纳滨对虾对家蝇蛆粉的表观消化率。以氧化钇(Y203)为指示剂,按照“70%基础饲料+30%试验原料”的方法测定了初始体重(2.20±0.15)g凡纳滨对虾对家蝇蛆粉的表观消化率。结果显示,凡纳滨对虾幼虾对家蝇蛆粉干物质、粗蛋白、粗脂肪和能量的表观消化率分别为68.18%、83.34%、89.26%和75.38%。凡纳滨对虾对家蝇蛆粉总氨基酸的消化率为86.56%,氨基酸消化率的变化范围为80.74%-92.31%,其中组氨酸、精氨酸、异亮氨酸和脯氨酸的消化率均在90%以上。本研究结果为评价家蝇蛆粉的营养价值及其在凡纳滨对虾饲料中的应用提供了参考依据。2.家蝇蛆粉替代鱼粉对凡纳滨对虾生长、抗氧化和免疫指标的影响。选用960尾体重为(0.56±0.03)g的凡纳滨对虾随机分为6组,分别投喂用家蝇蛆粉替代鱼粉的6种饲料,替代比例(等蛋白替代)分别为0、20%、40%、60%、80%和100%,记为G0、G20、G40、G60、G80和G100,养殖时间为45d。结果显示,G20-G60组凡纳滨对虾的增重率(WGR)与对照组相比差异不显著(P>0.05),G80、G100组WGR显著降低(P<0.05)。除G40组外,各替代组凡纳滨对虾的特定生长率(SGR)均显著低于对照组(P<0.05)。G100组摄食量(FI)显著低于其它各组(P<0.05)。当替代水平不超过60%时,家蝇蛆粉对凡纳滨对虾的饲料系数(FCR)、蛋白质效率(PER)、蛋白质沉积率(PDR)和肝胰指数(HSI)影响不显著(P>0.05);随替代水平的继续增加,FCR和HSI显著升高,PER和PDR显著降低(P<0.05)。替代组对虾肥满度(CF)和存活率(SR)均不同程度的高于对照组,但差异不显著(P>0.05)。随家蝇蛆粉替代水平的增加,全虾粗蛋白、钙(Ca)和总磷(P)含量显著升高(P<0.05),粗脂肪含量显著降低(P<0.05),干物质和灰分含量差异不显著(P>0.05)。各替代组对虾血清和肝胰腺超氧化物歧化酶(SOD)活性、血清丙二醛(MDA)含量与对照组相比差异不显著(P>0.05),G80和G100组肝胰腺MDA含量显著高于对照组(P<0.05)。血清酚氧化酶(PO)活性随家蝇蛆粉替代量的增加而显著降低,其中G20组显著高于其它各组(P<0.05)。肝胰腺碱性磷酸酶(AKP)活性随添加量的增加而显著降低(P<0.05)。家蝇蛆粉替代鱼粉对凡纳滨对虾的血细胞总数(THC)、血清一氧化氮(NO)含量、AKP活性和肝胰腺PO活性、NO含量影响不显著(P>0.05)。在本试验条件下,综合考虑凡纳滨对虾的生长性能、抗氧化和非特异性免疫等指标,家蝇蛆粉可替代40%鱼粉,其最大替代量不宜超过60%。3.家蝇蛆粉替代鱼粉对凡纳滨对虾肌肉营养成分、氨基酸和肌苷酸含量的影响。在上述替代试验养殖结束时,制备各组肌肉样品,测定肌肉水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分含量,分析肌肉游离氨基酸、结合氨基酸以及肌苷酸含量。结果显示,对虾肌肉粗蛋白和灰分含量随家蝇蛆粉替代水平的增加而升高,其中G100组粗蛋白含量和G80~G100组灰分含量显著高于对照组(P<0.05);水分和粗脂肪含量在各组之间差异不显著(P>0.05)。各组肌肉游离氨基酸中谷氨酸、丙氨酸等鲜味氨基酸和游离鲜味氨基酸总量之间无显著性差异(P>0.05);除G40组外,G20~G100组游离必需氨基酸总量显著高于对照组(P<0.05);与对照组相比,替代组游离精氨酸含量显著增加(P<0.05),游离赖氨酸含量随替代水平的增加而显著降低(P<0.05);G20组游离氨基酸总量显著高于对照组(P<0.05),其它各组之间差异不显著(P>0.05)。替代组肌肉结合氨基酸中天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸和丙氨酸等鲜味氨基酸、必需氨基酸和氨基酸总量与对照组相比差异均不显著(P>0.05)。G20-G80组肌肉肌苷酸含量与对照组相比差异不显著(P>0.05),G100组显著升高(P<0.05)。结果表明,当家蝇蛆粉替代鱼粉水平不超过60%时,除凡纳滨对虾肌肉游离精氨酸含量显著升高外,对肌肉常规营养成分组成和必需氨基酸、鲜味氨基酸和肌苷酸含量无显著性影响。4.家蝇蛆粉替代鱼粉对凡纳滨对虾消化酶活性、肝胰腺组织结构和转氨酶活性的影响。在上述替代试验养殖结束后,测定各组对虾肝胰腺、胃和肠道蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性,分析肝胰腺的组织结构和转氨酶活性。结果显示,家蝇蛆粉替代鱼粉对凡纳滨对虾肝胰腺、胃和肠道的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性均无显著性影响(P>0.05);家蝇蛆粉对凡纳滨对虾肝胰腺的组织结构有不同程度的损伤,G20和G40组凡纳滨对虾肝胰腺肝小体排列整齐,基底膜完整,管腔呈星形,与对照组相比上皮细胞空泡化增多,上皮细胞中出现未知物质;G60组肝小体上皮细胞中未知物质的量有所增加;当替代水平高于80%时,肝小体中未知物质含量明显增加,肝小体的星形管腔部分丧失,G100组凡纳滨对虾肝小体萎缩,部分含有未知物质的上皮细胞破裂;替代组凡纳滨对虾肝胰腺谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性均不同程度降低,与对照组相比差异不显著(P>0.05),血清AST活性则呈现出显著降低的趋势(P<0.05)。结果表明,蝇蛆粉替代鱼粉不会显著降低凡纳滨对虾肝胰腺、胃和肠道的消化酶活性,但过高替代会对肝胰腺的组织结构造成损伤,建议蝇蛆粉的替代水平不宜超过60%。5.家蝇蛆粉替代鱼粉对凡纳滨对虾肝胰腺组织蛋白酶B和核糖体蛋白L8基因表达量的影响。在上述替代试验养殖结束后,制备肝胰腺样品,分析各组肝胰腺组织蛋白酶B和核糖体蛋白L8基因表达量。结果显示,蝇蛆粉替代鱼粉对凡纳滨对虾肝胰腺组织蛋白酶B (CATB)的表达量有显著性影响(P<0.05),替代组CAT B的表达量均高于对照组,其中G40和G100组CAT B的表达量显著高于对照组(P<0.05),G100组的表达量最高。蝇蛆粉替代组凡纳滨对虾的核糖体蛋白L8(RPL8)的基因表达量均高于对照组,与对照组相比上调了21%~29%,但各组之间差异不显著(P>0.05)。
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