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目的:乌灵菌是中国传统名贵中草药,具有利尿、补心神、治失眠、吐血及产后失血等药用价值。本实验主要采用高效液相色谱技术建立乌灵菌醇提物组分及多糖组分的指纹图谱,并同时检测乌灵菌中四种特征成分的含量。 方法:将由浙江佐力药业有限责任公司提供的20批乌灵菌菌丝体粉末样品使用甲醇提取,采用正交试验的方法考察具体的提取条件,醇提物样品通过高效液相色谱法梯度洗脱,得出色谱图后使用中药指纹图谱相似度评价系统2004A版软件计算得到乌灵菌醇提物组分的指纹图谱,并用同法制备百令片及金水宝胶囊的醇提物,进样分析,将结果与乌灵菌的指纹图谱进行对比,对该指纹图谱进行再验证;使用高效液相色谱法精确测定乌灵菌醇提物中腺苷、染料木素、5-甲基蜂蜜曲霉素和大豆苷元的含量;采用水提醇沉法提取乌灵菌中的多糖,经三氟乙酸水解、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生化反应后,进样至高效液相色谱仪中进行分析,建立乌灵菌多糖组分的指纹图谱,并用同法制备百令片及金水宝胶囊的多糖组分,进样分析,将结果与乌灵菌的指纹图谱进行对比,对该指纹图谱进行再验证。 结果:通过对20批乌灵菌样品的醇提物使用高效液相色谱法进行分析,将结果用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版软件进行计算,得到了共有18个共有峰的乌灵菌醇提物组分指纹图谱,各批次色谱图与对照指纹图谱见的相似度均大于0.99,该指纹图谱与同法得到的百令片和金水宝胶囊醇提物的图谱有明显差异,进一步验证了乌灵菌醇提物的指纹图谱;建立了乌灵菌醇提物中腺苷、染料木素、5-甲基蜂蜜曲霉素和大豆苷元四种特征成分的含量测定方法,测定了20批乌灵菌中这四种特征成分各自的含量;测定了乌灵菌多糖组分的单糖组成,发现乌灵多糖应该是由7种单糖组成,其中绝大部分为葡萄糖,甘露糖、半乳糖的占比也较高,同时建立了乌灵菌多糖组分的指纹图谱,各图谱间的相似度均大于0.9,符合相关技术要求,与同法得到的百令片和金水宝胶囊多糖的图谱相比,乌灵菌的多糖组分指纹图谱明显不同,同样说明该指纹图谱符合要求。 结论:本实验建立了乌灵菌醇提物的指纹图谱,该方法的精密度、重复性及稳定性等方法学考察均符合相关规定,与同类真菌药物同法测定的图谱显著不同,表明本实验所建立的乌灵菌醇提物指纹图谱可以反映出乌灵菌的独特性;本实验建立了在一次分析过程中同时测定四种特征成分含量的方法,该方法经验证,符合相关要求,可作为乌灵菌质量控制中特征成分的含量测定方法;本研究建立的乌灵菌多糖组分指纹图谱是首次报道的考察乌灵菌多糖组成的研究,初步分析得出了乌灵多糖的一级结构组成,该指纹图谱符合相关要求,可作为乌灵菌多糖成分的质量控制指标。