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目的:南药“裸花紫珠”为马鞭草科植物裸花紫珠(Callicarpa nudiflora Hook.etAm.)的干燥叶或带嫩枝的叶,1977年《海南药物志》首次根据中医辨证记载裸花紫珠具有“止血止痛、散疲消肿、祛风除湿”的功效,用于“消化道出血、创伤出血、跌打损伤和风湿痹痛等”的治疗,其片剂在临床上广泛用于止血、抗炎,由于疗效确切,近年来已成为南方特别是岭南地区医院的抗炎全科用药。然而,迄今为止,有关裸花紫珠药材及其制剂的质量研究尚鲜有报道,其制剂的药代动力学研究则未见报道。苯乙醇苷类成分(phenylethanoid glycosides,PhGs)为裸花紫珠药材的主要成分类群,该类成分具有显著的生物活性。本论文选取3个该类成分—连翘酯苷B(forsythiaside B)、毛蕊花糖苷(acteoside)和异毛蕊花糖苷(isoacteoside)为指标成分,建立同时测定3种成分含量的HPLC法,并通过比较不同药用部位、不同生长年限、鲜品和干品等样品中苯乙醇苷类含量的差异,为药材质量控制提供科学依据;测定药材、片剂中间体及片剂中上述成分的含量,以研究在制片剂工艺过程中苯乙醇苷类成分的变化;测定大鼠口服裸花紫珠片后上述成分在体内的血药浓度—时间曲线、主要药动参数和主要脏器组织分布情况,为该类成分在体内的变化过程提供依据。方法:1.采用大孔树脂、反相键和硅胶、葡聚糖凝胶等柱层析分离纯化技术对裸花紫珠药材中的3种PhGs成分进行分离纯化,用3种不同展开系统进行TLC法和HPLC法进行纯度检查,并通过质谱、碳谱、核磁共振氢谱等现代波谱技术进行结构鉴定。2.建立测定裸花紫珠药材、片剂中间体和片剂中3种PhGs成分含量的HPLC法,色谱条件为:Agilent1260 高效液相色谱仪;Agilent ZorbaxSB-C18 4.6 mm×150mm,5μm色谱柱;流动相为甲醇—0.1%甲酸水溶液(40:60);检测波长334nm。3.采用LC-MS/MS法测定单剂量口服给予裸花紫珠片后不同时间点大鼠血浆及主要脏器中3种PhGs成分的含量。仪器为Agilent 1260-6460 LC-MS/MS液质联用色谱仪,色谱条件为:PhenomenexLuna5umC18(2)100A150mm×2.0mm 色谱柱;流动相体系为乙腈—0.1%甲酸水梯度洗脱。质谱条件为ESI+Agilent JetS离子源;干燥气温度300 ℃;干燥气流量5 1/min;雾化气压力45 psi;鞘气温度300℃;鞘气流量111/min;毛细管电压3500 V;喷嘴电压500 V。定量分析的离子(m/z)分别为755→161(连翘酯苷B,49 eV),623→161(毛蕊花糖苷,33 eV),623→161(异毛蕊花糖苷,37 eV),163→119(对香豆酸,13 eV)。4.生物样品处理方法:分别取大鼠血浆和各组织均浆液各100 μl,加入10 μl对香豆酸,涡旋振荡3 min混匀,再加入290 μl甲醇,涡旋振荡5 min后以12000 r/min,4 ℃冷冻离心15 min,取上清液,在相同条件下再次离心5 min,取上清液5 μl进样分析,数据处理采用DAS3.2.8软件。成果:1.建立了制备连翘酯苷B、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的方法,制得连翘酯苷B 736 mg,毛蕊花糖苷129 mg,异毛蕊花糖苷118 mg,纯度均大于98%。2.在裸花紫珠药材含量测定中,连翘酯苷B含量在0.02～10.47 mg/g之间,毛蕊花糖苷0.06～65.43 mg/g,异毛蕊花糖苷0.01～6.70mg/g。3种苯乙醇苷类成分在不同药用部位中的含量以叶中最高;鲜品中的含量高于干品;对于不同生长年限的样品一年生叶中最高,表明苯乙醇苷类成分的含量随着生长年限的增长而降低,本研究的结果为制定药材采收及加工方法提供一定的依据。在药材、片剂中间体和片剂的含量测定中,药材提取后的出膏率为30%,药材中连翘酯苷B平均含量5.26 mg/g、毛蕊花糖苷平均含量29.75 mg/g和异毛蕊花糖苷平均含量4.94mg/g,片剂中间体中3者的含量分别为:31.49mg/g,20.22mg/g和24.45 mg/g,从药材到片剂中间体3者的转移率分别为:55.67%,20.39%和67.36%,提示毛蕊花糖苷可能稳定性较差,发生部分降解,连翘酯苷B和异毛蕊花糖苷在提取过程中的转移率较大;片剂中3者的平均含量分别为:30.73 mg/g,17.09 mg/g和23.87 mg/g,从片剂中间体到片剂中3者的转移率分别为:97.59%,84.52%和97.63%,说明制剂工艺过程对3者含量影响较小。3.LC-MS/MS法测定血浆样品中3种PhGs成分含量,得到浓度—时间数据,绘制药时曲线,并通过DAS 3.2.8软件对数据进行拟合。药时曲线呈双峰,连翘酯苷B、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的达峰时间(tmax)分别为:0.50 h、0.75 h、0.50 h,提示3种苯乙醇苷类成分在大鼠体内胃肠道中的吸收较为迅速,裸花紫珠片中3种PhGs成分在心脏、脾脏、肺、肾脏、脑、肌肉、卵巢、睾丸和胃中的浓度-时间曲线也出现双峰现象,达峰时间间隔短,与血浆中浓度—时间曲线一致,进一步解释药物在胃肠道中吸收快;连翘酯苷B、毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的消除半衰期(t1/2)分别为5.57 h、7.26 h、4.09 h,说明其消除速度中等偏慢。测定组织中3种PhGs成分含量,结果可知这些成分在组织中的分布广泛;在胃、十二指肠中浓度大,提示可能与其代谢主要发生在胃肠道有关;在脑和睾丸中均可测出3种成分含量说明这些成分可透过血脑屏障和血睾屏障;在卵巢中可测出3种成分含量,并有一定浓度的蓄积,这为裸花紫珠片长期用于妇科疾病的治疗提供了临床依据。结论:本论文测定了裸花紫珠药材不同采收期、干鲜品和部位中3种PhGs成分含量,研究了裸花紫珠药材、片剂中间体和片剂中3种PhGs成分含量变化规律,为制剂工艺过程的控制和后期药动学实验提供依据。大鼠口服给予裸花紫珠片后,其体内药动学过程符合非房室模型,3种PhGs成分进入体内后迅速分布,吸收快,消除中等,组织中以胃、十二指肠浓度最高,可透过血脑屏障和血睾屏障。