背景:早在公元前28世纪,传统中药鼓槌石斛就具有广泛的临床应用,包括滋补、收敛、阵痛抗炎等疗效。天然产物毛兰素是在兰科植物鼓槌石斛全株中提取的联苄类化合物,它在2020版《中华人民共和国药典》中被规定用来作为鼓槌石斛质量控制的化学标志。有报道证实毛兰素对人肺癌细胞、乳腺癌细胞的增殖具有抑制作用,还具有促进肿瘤细胞凋亡的特性。综上,毛兰素可在多种机制作用下发挥其抗肿瘤活性,对于开发临床抗肿瘤药物有巨大潜力。方法:使用体外HeLa细胞模型和体内宫颈癌异种移植瘤模型探究毛兰素的抗肿瘤活性。首先,利用MTT实验、蛋白免疫印迹法、RT-PCR实验、分子对接模型、流式细胞术以及免疫共沉淀法研究与毛兰素抗肿瘤活性相关的蛋白质、基因、信号通路等。使用溶酶体染料将溶酶体的生物活性可视化,探究药物毛兰素对于溶酶体活性的影响。其次,分别进行细胞侵袭、伤口愈合、小管生成、细胞集落形成和Ed U增殖标记法来确定毛兰素对于细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。最后,使用肿瘤细胞与T淋巴细胞共培养模型探究毛兰素对于细胞毒性T淋巴细胞活力的影响。结果:数据表明,毛兰素抑制PD-L1的表达并诱导其通过溶酶体途径降解。毛兰素通过m TOR/p70S6K/4EBP1通路抑制HIF-1α合成,并抑制RAS/Raf/MEK/MAPK-ERK途径。免疫共沉淀实验表明毛兰素阻碍RAS与HIF-1α之前相互作用从而降低PD-L1的表达。使用肿瘤细胞与T淋巴细胞共培养模型证实了毛兰素能够恢复细胞毒性T淋巴细胞杀伤肿瘤细胞的能力。毛兰素抑制PD-L1介导的血管生成、增殖、侵袭和迁移。体内异种移植瘤实验支持了毛兰素的抗肿瘤增殖作用。结论:总的来说,这些结论揭示了先前未知的毛兰素的特性,并为通过靶向PD-1/PD-L1免疫检查点提高治疗宫颈癌和其他恶性肿瘤的免疫疗法的疗效提供了新的理论基础。