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一、目的O-Glc NAc糖基化是一种动态的翻译后修饰,是指在胞浆蛋白和核蛋白的Ser或Thr上以O-糖苷键连接单个N-乙酰葡糖胺(N-acetylglucosamine,Glc NAc)。这种动态修饰由O-Glc NAc糖基转移酶(OGT)催化,由O-Glc NAc糖苷酶(OGA)去除。子宫内膜接受性是指子宫内膜在一定时间内有利于囊胚生长、附着及随后植入事件的发生,这种状态的持续时间称为着床窗口期。目前对O-Glc NAc修饰功能的研究多集中在肿瘤的发生及转移上,肿瘤的侵袭和转移机制和胚胎与子宫内膜的识别、黏附类似。蛋白质糖基化修饰在胚胎着床及发育中起重要作用,但O-Glc NAc修饰在着床调控领域的作用研究尚属空白。本文检测了小鼠和人不同时期子宫内膜O-Glc NAc修饰蛋白表达差异,分别以子宫内膜癌细胞RL95-2/HEC-1A模拟高、低接受态子宫内膜,分析O-Glc NAc修饰在高低接受态子宫内膜细胞中的表达。以RNAi技术调控OGT和OGA的表达,分析O-Glc NAc修饰对子宫内膜细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响并检测对调控子宫内膜细胞EMT过程相关蛋白的调控作用。以绒毛膜肿瘤细胞系(JAR)模拟侵入性胚胎,检测调控子宫内膜细胞中OGT的表达对JAR细胞与子宫内膜细胞黏附的影响。我们揭示了O-Glc NAc修饰调控胚胎着床及子宫内膜容受性建立可能的相关性及分子机制,从而为拓宽临床生殖中蛋白质糖基化修饰作用提供理论依据。二、方法1、免疫组化检测:O-Glc NAc修饰蛋白在围着床期(D1-D5)妊娠小鼠子宫内膜的表达及分布规律。2、免疫组化及Western blot检测O-Glc NAc修饰蛋白在人月经周期各阶段子宫内膜中表达及分布情况。3、Real-time PCR检测O-Glc NAc糖基转移酶(OGT)在人月经周期不同阶段子宫内膜中的表达变化情况。4、Real-time PCR检测OGT、O-Glc NAc糖苷酶(OGA)在不同接受态子宫内膜细胞RL95-2(人高接受态子宫内膜细胞系)和HEC-1A(人低接受态子宫内膜细胞系)中表达情况。5、将小干扰RNA(si-NC、si-OGT)利用脂质体转染法转染到高表达OGT的RL95-2中,建立OGT沉默、O-Glc NAc糖基化修饰水平降低的细胞株。将si-NC、si-OGA转染到高表达OGA的HEC-1A细胞中,建立OGA沉默、O-Glc NAc糖基化修饰水平升高的细胞株。通过Real-time PCR和Western blot进行干扰效率的验证。6、JAR细胞模拟胚胎,体外黏附实验检测调控O-Glc NAc修饰对胚胎细胞与子宫内膜细胞之间黏附的影响。7、CCK-8、细胞划痕、Transwell小室检测调控O-Glc NAc修饰对子宫内膜细胞增殖、迁移和侵袭的影响。8、Western blot检测调控O-Glc NAc修饰水平的变化对EMT相关蛋白表达的影响。三、结果1、在妊娠围着床期小鼠子宫内膜中,D1-D4的O-Glc NAc修饰水平逐渐上升,D4达到顶峰,D5后降低。在小鼠子宫内膜组织中,O-Glc NAc糖基化修饰蛋白在各个部位都表达,但主要在基质细胞中表达。2、在临床增殖期子宫内膜,O-Glc NAc糖基化修饰蛋白几乎无表达。在分泌期子宫内膜,表达量明显上升。O-Glc NAc糖基化修饰蛋白主要定位人子宫内膜组织腺上皮和腔上皮细胞。3、分泌期子宫内膜OGT m RNA水平明显高于增殖期子宫内膜。4、在RL95-2细胞中,O-Glc NAc糖基转移酶(OGT)基因的表达明显高于HEC-1A细胞,O-Glc NAc糖苷酶(OGA)基因的表达明显低于HEC-1A细胞。5、RL95-2细胞中加入si-OGT后,下调OGT的表达使O-Glc NAc糖基化修饰水平降低。HEC-1A细胞中加入si-OGA后,下调OGA的表达,O-Glc NAc糖基化修饰水平升高,干扰模型构建成功。6、上调子宫内膜细胞中O-Glc NAc修饰水平会增强子宫内膜细胞的增殖、迁移和侵袭能力。7、上调子宫内膜细胞O-Glc NAc修饰水平能增加EMT相关蛋白的表达,促进EMT过程的发生,进而影响细胞的迁移和侵袭能力。8、JAR细胞与RL95-2细胞的黏附能力强于HEC-1A细胞。上调O-Glc NAc修饰可促进子宫内膜细胞与JAR细胞的黏附能力。四、结论1、O-Glc NAc修饰蛋白在着床窗口期表达增高,促进子宫内膜容受性的建立。2、O-Glc NAc修饰能够促进子宫内膜细胞增殖、迁移及侵袭能力,并促进胚胎细胞与子宫内膜细胞的黏附进而有利于子宫内膜容受性的建立和胚胎着床。3、O-Glc NAc修饰可能通过改变EMT相关蛋白的表达来影响细胞的迁移和侵袭能力。