【摘 要】
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目前,人类肿瘤的发生率极高,放射治疗是其重要的医学治疗手段,然而对于腹腔、盆腔等身体部位,这种治疗方式会产生一定的副作用,一定的辐射强度下会引发放射性肠炎,继而引起肠
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目前,人类肿瘤的发生率极高,放射治疗是其重要的医学治疗手段,然而对于腹腔、盆腔等身体部位,这种治疗方式会产生一定的副作用,一定的辐射强度下会引发放射性肠炎,继而引起肠道内细胞外基质成分(ECM)的过度沉积,发生放射性纤维化,肠纤维化的发生和发展严重影响患者愈后水平和生活质量。基质金属蛋白酶3(MMP-3)可以降解ECM,是重塑组织结构的关键酶,进而修复肠道组织。然而体内的MMP-3表达十分有限,机体不能主动修复完全,因而大量表达MMP-3可以作为放射性肠纤维化修复实验研究的靶点。本研究以小鼠软骨RNA为模板,克隆MMP-3基因,构建EGFP标记的MMP-3慢病毒表达载体(LV-MMP-3-EGFP),修饰小鼠胚胎干细胞(ES)和骨髓来源间充质干细胞(BM-MSCs);给予10GyX射线照射成纤维细胞(3T3),构建纤维化模型,将转染后的干细胞与纤维化细胞共培养,荧光显微镜下观察GFP绿色荧光蛋白,及共培养后纤维化细胞的形态变化,并用Western Blot检测MMP-3和TGF-β蛋白表达。现已成功构建慢病毒表达载体LV-MMP-3-EGFP,且成功转染GP2-293T细胞,ES细胞和BM-MSCs细胞;病毒感染的ES细胞中MMP-3蛋白表达高于对照组;病毒感染的ES细胞与3T3细胞共培养后,实验组与对照组中TGF-β蛋白表达无显著变化;病毒感染的BM-MSCs细胞与10 Gy X射线照射后的3T3细胞共培养后,实验组细胞形态和细胞密度发生变化。此结果表明LV-MMP-3-EGFP修饰的干细胞能够大量表达MMP-3蛋白,对放射后3T3细胞的异常增殖产生了抑制作用,细胞形态向正常形态发展,纤维化细胞发生修复,但是对3T3细胞中TGF-β表达没有显著影响。本研究为放射性肠纤维化的临床实验研究提供了理论基础和新的方向。
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