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干细胞是一类具有自我更新能力、无限增殖能力以及多向分化潜能的原始细胞。多项研究表明,骨髓、神经系统及前列腺等组织中存在干细胞。肿瘤干细胞是肿瘤细胞中一小部分具有干细胞性质的细胞群体,能够无限自我更新,并具有多种分化潜能和高度增殖能力,可产生不同表型的肿瘤细胞,形成新的肿瘤。肿瘤干细胞在白血病以及乳腺癌、脑肿瘤、前列腺癌、卵巢癌等实体肿瘤中的存在已经得到证实。恶性黑素瘤(malignant melanoma,MM)是一种高度恶性的黑素细胞肿瘤,原发皮肤多见,占皮肤恶性肿瘤的第三位(6.8%～20%),但死亡率达皮肤恶性肿瘤总数的80%左右,其世界范围内的发病率和死亡率均呈逐年上升趋势。传统放化疗及手术治疗在现阶段仍无法克服肿瘤复发、转移、化学耐药及高死亡率等现实问题,其可能原因之一是MM中肿瘤干细胞的存在所致。但有关MM肿瘤干细胞的研究国内尚无文献报道,国外也仅有少数文献报道。CD133是一种五次跨膜细胞表面糖蛋白分子,分子量120KD,其表达的特点是随着细胞的分化迅速下调,这使得它成为一个鉴定和分离干细胞的特异分子标志,其在骨髓、外周血造血干细胞和内皮干细胞表达,在成熟内皮细胞不表达。CD133可促进新生血管的生成及参与信号传递。研究发现,CD133也表达于其他系统的干细胞,如神经干细胞、胚胎干细胞、前列腺干细胞等,最近已证明它是脑肿瘤干细胞和前列腺肿瘤干细胞的标志之一。Nestin是一种存在于神经上皮干细胞的中间丝成分,在未分化的神经多能干细胞中表达,是神经干细胞的一个标记物,其在中枢神经系统干细胞、胰岛干细胞及胃肠干细胞中也有表达。研究证实Nestin是脑肿瘤干细胞的表面标志之一。CD44是一种细胞表面糖蛋白分子,是细胞黏附分子的成员之一,它广泛表达于正常人的上皮细胞、间质细胞及一些特定的肿瘤细胞表面,其在淋巴细胞归巢、细胞与细胞间粘附、细胞与基质间相互作用、免疫识别以及细胞的运动中起促进作用。有研究证实CD44与肿瘤的发生、发展、转移、复发关系密切,已经证实CD44为前列腺干细胞、卵巢癌肿瘤干细胞、乳腺癌肿瘤干细胞、前列腺癌肿瘤干细胞和肺癌肿瘤干细胞的表面标志之一。为探讨干细胞表面标志物在人MM组织、皮内痣组织中的表达及意义,我们采用免疫组化方法对CD133、Nestin和CD44的蛋白表达进行研究,旨在进一步证实MM中存在肿瘤干细胞,并为黑素瘤干细胞的鉴定和分选提供实验依据。材料与方法:1.采用免疫组化SP法检测CD133、Nestin和CD44在30例MM及30例皮内痣皮损中的表达。2.统计学处理:数据用(?)±S表示,采用SPSS10.0软件包进行数据分析,计数资料计算阳性表达率,两组中CD133、Nestin和CD44阳性表达率的比较用计数资料的χ~2检验(Chi-square);两组中CD133、Nestin和CD44阳性细胞率平均值的比较用t检验;Pearson法计算相关系数。检验水准均为α=0.05。结果:1.CD133的表达CD133在MM组、皮内痣组中的阳性表达率分别为53.33%(16/30)和23.33%(7/30),MM组与皮内痣组CD133的阳性表达率比较有统计学意义(χ~2=5.711,P=0.017)。CD133在MM组、皮内痣组中的阳性细胞率平均值分别为2.98%±5.62%和0.10%±0.21%,MM组与皮内痣组CD133的阳性细胞率比较有统计学意义(t=2.801,P=0.007)。CD133在MM中阳性细胞形态不一,呈圆形、椭圆形、梭形或多角形,大小不一,大部分阳性细胞在组织中散在分布,部分呈条索状或巢状排列;在皮内痣阳性细胞形态大小较为一致,呈圆形、椭圆形,多在组织中散在分布。2.Nestin的表达Nestin在MM组、皮内痣组中的阳性表达率分别为80.00%(24/30)和5333%(16/30),MM组与皮内痣组Nestin的阳性表达率比较有统计学意义(χ~2=4.800,P=0.028)。Nestin在MM组、皮内痣组中的阳性细胞率平均值分别为34.92%±34.89%和7.26%±13.13%,MM组与皮内痣组Nestin的阳性细胞率比较有统计学意义(t=4.065,P=0.000)。Nestin在MM中阳性细胞形态不一,呈圆形、椭圆形、梭形或多角形等,大小不一,大部分阳性细胞在组织中呈大的团块状或巢状分布,少量呈散在分布;在皮内痣阳性细胞形态大小较为一致,呈圆形、椭圆形,多在组织中散在分布,部分呈小的巢状分布。3.CD44的表达CD44在MM组、皮内痣组中的阳性表达率分别为20.00%(6/30)和0(0/30),MM组与皮内痣组CD44的阳性表达率比较有统计学意义(χ~2=6.667,P=0.010)。CD44在MM组、皮内痣组中的阳性细胞率平均值分别为1.28%±3.26%和0,MM组与皮内痣组CD44的阳性细胞率比较有统计学意义(t=2.153,P=0.037)。CD44在MM中阳性细胞形态不一,呈圆形、椭圆形、梭形、多角形等,大小不一,大部分阳性细胞在组织中散在分布,分布不均,偶有局灶性群聚分布现象;在皮内痣中呈阴性表达。4.CD133、Nestin和CD44在两组中阳性细胞率与患者性别、年龄、病程比较,差异均无统计学意义(P均＞0.05)。结论:1.MM肿瘤细胞中存在不同比例干细胞标志物CD133、Nestin和CD44的阳性表达,提示MM中可能存在肿瘤干细胞;2.皮内痣中也存在干细胞标志物CD133、Nestin的少量表达,提示皮内痣中可能存在黑素细胞干细胞。