论文部分内容阅读
一、研究目的以脑卒中为代表的心脑血管疾病已成为威胁我国居民健康的首要疾病,其中颈动脉狭窄不稳定斑块的脱落是导致脑卒中的重要病因。斑块内部坏死核心与纤维帽动态平衡是影响动脉粥样斑块稳定性的决定性因素。胞葬作用是吞噬细胞清除程序性死亡细胞的生理过程。在动脉粥样斑块中,巨噬细胞胞葬作用的清除能力可直接影响斑块内坏死核心的大小,胞葬作用水平下降将导致动脉粥样斑块稳定性降低。壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)是一种与缺血性脑卒中高度相关的分子标记物,本课题组的前期研究发现发现CHI3L1在颈动脉狭窄患者血清中升高,且可能与斑块不稳定性相关,目前关于CHI3L1对动脉粥样斑块稳定性的影响及其可能的作用机制尚无报道。了解CHI3L1对动脉粥样斑块稳定性的影响,将有助于脑卒中高危患者的早期诊断及早期治疗。因此本课题主要进行的研究为明确CHI3L1对动脉粥样斑块的影响并探究其具体的作用机制。二、研究方法本课题拟在体内临床样本、体外细胞及动物模型水平明确CHI3L1中对患者动脉粥样斑块的影响。首先明确颈动脉狭窄患者的斑块样本CHI3L1内的表达和分布,同时分离培养人及小鼠的原代巨噬细胞,研究CHI3L1在体外对巨噬细胞胞葬作用的影响。随后利用CHI3L1及其中和抗体干预已构建的颈动脉不稳定斑块小鼠模型,明确CHI3L1在体内对巨噬细胞胞葬作用及斑块稳定性的影响。并利用蛋白质组学和生物信息学技术筛选CHI3L1下游的靶基因,并探究其调控的具体分子机制。三、研究结果我们通过临床样本的组织切片分析及RNA检测,明确CHI3L1在不稳定动脉粥样硬化斑块中表达水平较高,且主要分布在斑块坏死核心附近。提取小鼠骨髓巨噬细胞及人外周血巨噬细胞后,通过流式细胞术及激光共聚焦显微镜证明CHI3L1可抑制巨噬细胞的胞葬作用。在构建的颈动脉不稳定斑块小鼠模型中,注射CHI3L1的小鼠与对照组相比,胞葬作用减弱且斑块较不稳定,而予中和抗体注射的小鼠较对照组,胞葬作用较强且斑块较稳定。通过分析临床样本及蛋白质组学技术,筛选出CHI3L1影响胞葬作用的靶基因MFGE8,并通过细胞实验进行了验证。通过回补MFGE8后观察巨噬细胞胞葬作用变化,证实CHI3L1是通过抑制MFGE8表达而抑制巨噬细胞胞葬作用。四、研究结论本课题证实CHI3L1可降低动脉粥样斑块的稳定性。同时本课题通过原代巨噬细胞的体外实验及构建不稳定动脉粥样斑块模型小鼠,明确CHI3L1通过下调胞葬桥接分子MFGE8的表达抑制巨噬细胞的胞葬作用,进而导致粥样斑块坏死核心增大引起斑块稳定性降低。