Hippo-YAP/TAZ信号通路与三阴性乳腺癌的相关性研究

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目的:  乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,严重威胁女性健康。根据对有关癌症发病率及死亡率的数据监测分析显示,我国女性乳腺癌的发病率和死亡率每年都在不断上升。三阴性乳腺癌(Triple-negative breast cancer, TNBC)是乳腺癌的一种亚型,是指雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体-2 (HER-2)均为阴性表达的乳腺癌。TNBC由于缺乏拮抗激素及抗HER-2治疗的靶点,目前仍然缺乏相应的有效治疗方案,其预后极差。因此,探索和发现新的靶向治疗分子,成为提高 TNBC 治疗效率的当务之急。前期研究表明, Hippo-YAP/TAZ信号通路在很多恶性肿瘤的发生发展中发挥重要作用。本论文重点探讨 Hippo-YAP/TAZ 信号通路在三阴性乳腺癌中的作用,确定Hippo-YAP/TAZ信号通路为三阴性乳腺癌的标志性细胞信号途径,以期应用于三阴性乳腺癌的临床诊断和治疗。  方法:  1、采用RT-qPCR技术检测三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞和非三阴性乳腺癌MCF7细胞YAP、TAZ、CYR61及CTGF mRNA表达水平。  2、采用免疫荧光技术检测LPA刺激三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞和非三阴性乳腺癌MCF7细胞后YAP、TAZ在细胞中的表达及定位。  3、采用慢病毒表达系统在三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞敲低YAP表达,观察对细胞增殖的影响。  4、收集乳腺癌肿瘤组织样品(含109例三阴性乳腺癌和140例非三阴性乳腺癌)及相应的临床资料,对其临床特征进行统计学分析。  5、将109例三阴性乳腺癌和140例非三阴性乳腺癌肿瘤组织样品制成组织芯片,免疫组化染色法检测Hippo-YAP/TAZ信号通路相关蛋白YAP、TAZ及下游的靶分子CYR61的表达及亚细胞定位,并统计分析YAP、TAZ、CYR61的表达与三阴性乳腺癌的相关性。  结果:  1、三阴性乳腺癌细胞中YAP、TAZ及CYR61、CTGF的mRNA水平显著高于非三阴性乳腺癌细胞中的水平。  2、LPA刺激三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞可明显促进YAP的核定位,而对非三阴性乳腺癌MCF7细胞则没有此效应。  3、敲低YAP表达的三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖受到抑制。  4、在对乳腺癌患者临床资料分析后发现三阴性乳腺癌患者较非三阴性乳腺癌患者其临床分期较晚、肿瘤体积显著增大、转移复发率显著增高。  5、对乳腺癌患者肿瘤组织芯片进行免疫组化染色分析,结果表明YAP、TAZ、CYR61在三阴性乳腺癌肿瘤组织中的阳性率较非三阴性乳腺癌显著增高。  结论:  三阴性乳腺癌细胞Hippo-YAP/TAZ信号显著强于非三阴性乳腺癌细胞,并且敲低YAP会显著抑制三阴性乳腺癌细胞的增殖,表明Hippo-YAP/TAZ信号通路在三阴性乳腺癌细胞增殖方面起重要作用。三阴性乳腺癌较非三阴性乳腺癌临床分期晚、肿瘤体积增大、预后差。而Hippo-YAP/TAZ信号通路主要的效应分子YAP、TAZ及下游靶基因CYR61、CTGF在三阴性乳腺癌中表达显著高于非三阴性乳腺癌,表明Hippo-YAP/TAZ信号通路与乳腺癌三阴性存在显著的相关性。  本研究表明Hippo-YAP/TAZ信号通路可能是三阴性乳腺癌发生发展过程中的一条标志性信号途径,因此也可能为三阴性乳腺癌靶向治疗提供有效靶分子。
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