心理应激是指有机体在某种环境刺激作用下由于客观要求和应付能力不平衡所产生的一种适应环境的紧张反应状态。在现代社会中,各种各样的应激原如激烈的竞争、快速的工作节奏、逐渐增大的生活压力等等,都在影响着人们的生理和心理状态。短期或适度的心理应激可提高机体的警惕水平,有益于人体的健康和功能活动,但心理应激状态时间过长或强度过大就会对人体产生有害作用。如今,心理应激与心身疾病发生发展的关系已经越来越受到人们的重视。口腔正常的咬合功能是咀嚼肌、颞下颌关节、牙牙合关系在中枢神经系统作用下相互支持,相互制约的结果,而咬肌是口颌面部重要的咀嚼肌之一,它参与了口腔咀嚼、吞咽、言语等多种功能活动。另外,升颌肌中肌梭等本体感受器分布密度高于降颌肌,而咬肌又是升颌肌中肌梭分布密度最高、对各种应激状态的反应最为及时、敏感的一对肌肉。现代医学针对心理应激对口颌肌影响的研究已取得了一定的进展。临床流行病学调查证实心理应激与口颌系统疾病之间存在密切关系,本系列研究的前期动物实验也证明,咬肌的形态学、肌组织代谢、肌纤维牙型转化、肌肉疼痛阈等诸多方面都与心理因素密不可分。然而,心理应激对咬肌影响的机制仍不明确,还有待于进一步深入的研究。因此,本实验在课题组前期工作的基础上,选取咬肌作为切入点,采用心理应激交流箱建立大鼠心理应激模型,在检测动物行为学改变以确保实验大鼠处于心理应激状态的基础上,观察咬肌组织中自由基代谢、HSP70表达的变化,并计算二者之间的相关性,为更深入研究心理应激导致口颌肌疲劳、功能紊乱乃至口颌系统疾病的机制提供实验依据,并为口颌肌功能紊乱的防治奠定实验基础。本实验共分为三个部分。第一部分实验观察大鼠心理应激后的行为学变化。选取72只雄性SD大鼠,随机分为心理应激组(Psychological stress group, PS组)、足部电击组(Footshock group,FS组)和空白对照组,每组24只。各组再按照实验时间分为1周、3周和5周三个亚组,其中空白对照组不接受任何外界刺激,FS组大鼠接受足部电击,仅作为应激原,最后将PS组和对照组大鼠纳入实验研究。整个实验期间所有大鼠同条件饲养。在各时间点,测量大鼠体重,采用高架十字迷宫(Elevated plus maze,EPM)实验和动物旷场(Open field)实验观察心理应激对大鼠行为学特征的影响。EPM实验结果显示:随着心理应激时间的增长,PS组大鼠进入开臂的次数逐渐减少,呈现时间依赖性,进入开臂的时间在心理应激3周和5周后与对照组比较出现差异,5周时达到最低;3周和5周PS组大鼠进入闭臂次数少于对照组,而各实验时间点在闭臂停留的时间却均明显增长;并且后两个时间点PS组大鼠在EPM中的移动距离也较对照组减少。旷场实验结果显示:PS组大鼠应激3周和5周后,旷场移动速度和移动距离小于对照组,中央区活动时间随心理应激时间递减,且均低于对照组。第一部分实验证实了心理应激可以影响大鼠的行为,在此基础上我们进行第二部分实验。大鼠心理应激建模第1、3、5周行为学观察后处死大鼠,取咬肌组织检测自由基代谢情况,结果显示:肌组织中SOD活力和GSH-PX活力在3周和5周应激组中出现降低,但5周PS组较3周PS组的两种抗氧化酶酶活性均有回升;CAT活力3周和5周PS组均低于同时间点对照组;PS组大鼠咬肌中MDA含量在3周时最多,到5周时又开始减少,但仍高于对照组;H2O2含量仅3周PS组与对照组有差异。随后,在第三部分实验中,我们运用免疫组织化学染色和Western blot方法检测咬肌中HSP70的表达情况。结果发现:1周和3周PS组大鼠咬肌中热休克蛋白70(HSP70)表达无明显变化,而心理应激5周后,大鼠的HSP70表达较同时间点对照组增强,亦高于1周和3周PS组大鼠。同时,我们计算HSP70相对灰度值与自由基代谢之间的相关性,发现肌组织中HSP70的表达与MDA含量呈负相关。实验结论:1、心理应激交流箱可有效建立大鼠心理应激模型;心理应激可以引起大鼠焦虑样行为。2、心理应激状态能够引起大鼠咬肌自由基代谢异常,这可能是心理应激导致咀嚼肌功能紊乱的机制之一。3、长期心理应激引起大鼠咬肌中HSP70的表达增强,而HSP70的表达增强可能控制自由基代谢,减轻自由基对咀嚼肌的损伤。