丹参酚酸A对大鼠脑缺血后Notch1蛋白表达及脑水肿形成的影响

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目的:  研究丹参酚酸A对成年大鼠缺血性脑损伤后Notch1蛋白表达及脑水肿形成的影响,以进一步阐明丹参酚酸A可通过Notch通路起神经保护作用及抑制缺血性脑水肿的发生发展,为临床上应用丹参酚酸A治疗缺血性脑卒中及其伴随的缺血性脑水肿的提供理论依据。  方法:  将126只成年SD雄性大鼠运用随机法分成3组后,分别为假手术组(Sham组)、大脑中动脉闭塞模型组(MCAO组)、丹参酚酸A干预组(SalA组);Sham组不予缺血处理、MCAO组和SalA组运用线栓法建立左侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。Sham组和MCAO组建立模型后连续7d按5ml/Kg/d腹腔注射生理盐水,SalA组建立模型后连续7天按5mg/Kg/d腹腔注射丹参酚酸A(0.5mg/ml)。建立模型复苏后各组分行Longa评分,1d后再次进行Longa评分评估模型建立情况,随后断颈取脑,运用称重法测定脑指数并进行TTC染色法测定脑梗死体积。在模型建立后的1d、3d、7d行mNSS评分评估神经功能恢复情况,随后断颈取脑组织,HE染色法观察脑组织结构变化,干湿脑重法测定脑含水量,免疫组化检测Notch1蛋白的表达。  结果:  (1)Longa评分:Sham组无神经功能缺损症状,SalA组建立模型1d后Longa评分较建立模型复苏后评分减少明显,有统计学意义。  (2)相对脑梗死体积比:Sham组无明显的白色缺血梗死病灶;与Sham组相比较,MCAO组梗死明显;SalA组与MCAO组相比较梗死体积有所减少。  (3)脑指数:Sham组脑实质无明显肿胀、脑指数稳定;与Sham组相比较,MCAO组脑指数增加明显;MCAO组的脑指数明显高于SalA组。  (4)mNSS神经功能评分:Sham组无神经功能缺损症状,而MCAO组和SalA组均存在神经功能缺损体征并呈动态减轻;在固定观察时间点,两两组间比较神经功能评分提示差异有统计学意义。  (5)脑含水量:Sham组脑实质无苍白浮肿、脑含水量稳定;  MCAO组和SalA组脑实质含水量呈动态变化,在第1d脑含水量开始增加,第3天时脑含水增加最明显、达到峰值,随后开始下降;在固定观察时间点,与Sham组相比,MCAO组和SalA组脑实质含水量均增加;与MCAO相比,SalA组脑实质含水量均减少。  (6)HE染色:Sham组术侧脑组织结构正常、无缺血受损表现。MCAO组缺血坏死区域结构疏松、神经元细胞数量减少、细胞质呈空泡状、细胞核固缩或碎裂、炎症细胞浸润明显。SalA组的细胞肿胀、神经元丢失、炎性浸润等缺血损伤程度较MCAO组轻。  (7)免疫组化提示:Sham组脑实质中Notch1这一Notch通路靶蛋白表达稳定;而MCAO组和SalA组脑实质中Notch通路靶蛋白表达呈动态变化,在第1d表达开始增加,第3天时表达量加最明显、达到峰值,随后开始下降;在固定观察时间点,与Sham组相比,MCAO组和SalA组脑实质中Notch1靶蛋白表达均增加;与MCAO相比,SalA组脑实质中Notch1靶蛋白表达均减少。  结论:  1、SalA能减轻缺血性脑损伤及其伴随的缺血性脑水肿症状,说明SalA具有多效性神经保护作用。  2、脑缺血损伤后可激活Notch通路,促进脑水肿的发生发展。  3、SalA能通过抑制脑缺血损伤后Notch通路活化,起脑神经保护作用。
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