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牛多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)是引起我国牛呼吸系统疾病(Bovine respiratory disease,BRD)的主要病原体之一,其通常作为条件致病菌感染牛的上呼吸道,育肥牛经长途运输,天气骤变或其它应激条件刺激后易感染该病原。目前,由Pm引发的牛呼吸系统疾病主要依赖抗生素进行治疗,但随着抗生素压力的持续存在,该病原已逐渐对常用抗生素产生了耐药性,伴随着耐药性的不断增强,给巴氏杆菌病的治疗及公众健康都带来了较大的威胁。本研究利用琼脂二倍稀释法对分离自6个省份的23株牛源荚膜血清A型Pm进行最低抑菌浓度(MIC)检测,测定结果显示:23株Pm均对氨基糖苷类抗生素存在一定程度的耐药性。其中,受试菌对链霉素、新霉素、阿米卡星及卡那霉素耐药率分别达到52.2%,87.0%,100%,69.6%,对大观霉素及庆大霉素相对敏感。进一步对大观霉素和庆大霉素进行耐药性风险分析的结果显示:体外诱导获得的3株庆大霉素高度耐药菌株(Pm-Q2,Pm-Q3,Pm-Q4)对除大观霉素外其它受试氨基糖苷类抗生素均呈高度耐药,体外诱导获得的3株大观霉素高度耐药株(Pm-D1,Pm-D3,Pm-D5)对其它受试氨基糖苷类抗生素无交叉耐药性。在此基础上,对上述菌株进行氨基糖苷类抗生素耐药基因检测及相关耐药基因表达量分析。利用PCR扩增的方法对氨基糖苷类抗生素耐药基因检测的结果显示:23株临床分离Pm及6株体外诱导高度耐药菌中均存在strB,aphA及aacA4基因;采用实时荧光定量PCR方法对3种氨基糖苷类耐药基因表达量差异检测结果显示:体外诱导庆大霉素高度耐药的菌株在高浓度抗生素压力下,其体内氨基糖苷类耐药基因strB,aphA及aacA4的表达量均显著提高。由此可见,临床分离Pm携带的strB,aphA及aacA4基因可在不同浓度药物压力下,通过基因表达水平的改变参与介导Pm氨基糖苷类抗生素的耐药性。进一步对诱导耐药菌株进行16S rRNA及核糖体蛋白S5靶位突变检测,测定结果显示:3株体外诱导大观霉素高度耐药菌株在16S rRNA上无突变位点,但在编码核糖体蛋白S5的rpsE基因上均发生了9个碱基的缺失,进而导致核糖体蛋白S5的31至33位连续3个氨基酸丢失;3株体外诱导庆大霉素高度耐药株中未发现有意义的突变位点。由此可见,编码核糖体蛋白S5的rpsE基因突变可参与介导Pm对大观霉素的耐药性。