【摘 要】
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人乳头瘤病毒（Human Papillomavirus,HPV）是双股DNA病毒.该研究首先进行的是体外的实验部分.运用PCR方法,以HPV58全基因克隆为模板,扩增HPV58E6全长基因片段.利用基因重组技术,
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人乳头瘤病毒（Human Papillomavirus,HPV）是双股DNA病毒.该研究首先进行的是体外的实验部分.运用PCR方法,以HPV58全基因克隆为模板,扩增HPV58E6全长基因片段.利用基因重组技术,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3的T<,7>启动子下游,体外转录成mRNA后,在源自网织红细胞的翻译缓冲液中表达含生物素标记的HPV58 E6蛋白,后经化学发光系统检测,X光胶片曝光显影鉴定,证实成功地表达了含有生物素标记的HPV58 E6蛋白.运用同样的方法,我们又在体外转录翻译了带有生物素标记的HPV16 E6蛋白及p53,p73β和p63α蛋白.为了通过GST沉降实验检测E6蛋白和p53蛋白家族成员的结合情况,我们还构建了HPV58 E6的重组原核表达质粒pGEX-HPV58 E6,并且在大肠杆菌中表达并纯化了GST-HPV58 E6融合蛋白和GST-HPV16E6融合蛋白.通过此项研究我们阐明了不同类型的乳头瘤病毒E6蛋白与p53蛋白家族成员的作用关系.HPV16 E6与p73β和p63α蛋白之间没有检测到有效的相互作用.而且,p73和p63能够通过p53的途径抑制细胞增殖,诱导凋亡,尤其是它们可以诱导缺失p53基因的肿瘤细胞凋亡以及不被某些能灭活p53基因的病毒癌蛋白所降解的特性,更使其可能成为肿瘤基因治疗的新策略.
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