【摘 要】
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CTTN基因定位于人类染色体11q13.3,其编码的皮层肌动蛋白结合蛋白(Cortactin)存在于所有类型细胞中,是一个细长的单体蛋白,含有550个氨基酸。Cortactin含有N端酸性结构域(NTA
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CTTN基因定位于人类染色体11q13.3,其编码的皮层肌动蛋白结合蛋白(Cortactin)存在于所有类型细胞中,是一个细长的单体蛋白,含有550个氨基酸。Cortactin含有N端酸性结构域(NTA domain)、重复序列结构域(Repeat domain)、螺旋结构域(Helix domain)、富含脯氨酸结构域(PRD domain)和SH3结构域(SH3 domain)5个结构域。Cortactin蛋白结构在表达其的所有物种中高度保守。Cortactin激活后可促进肌动蛋白细胞骨架的聚合和重排,在细胞板状伪足形成、侵袭性伪足形成、细胞迁移和胞吞作用方面发挥重要作用。Cortactin最常见的表观修饰是酪氨酸磷酸化和丝氨酸/苏氨酸的磷酸化,机制研究清晰。除了磷酸化修饰外,Cortactin还可被乙酰化修饰,但相关研究较少,机制尚不清楚。本研究中,我们构建了CTTN慢病毒表达载体pGV358-CTTN。经过PCR和测序验证后,与慢病毒包装质粒pHelper 1.0及pHelper 2.0共转染293T细胞包装慢病毒。采用超速离心法收集慢病毒,获得的浓缩慢病毒液经过质量鉴定,支原体、衣原体、细菌和真菌均为阴性,内毒素含量<50EU/mL。应用荧光计数法测定CTTN过表达慢病毒滴度为2E+8TU/mL。CTTN过表达慢病毒的构建为研究Cortactin的乙酰化修饰提供了实验基础。
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